【摘 要】
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目的 构建前列腺特异性膜抗原启动子调控表达的FCY1/TK双自杀基因表达栽体,观察其时前列腺癌细胞LNCaP、PC-3的杀伤作用及在荷瘤裸鼠体内的押瘤作用.方法 PCR扩增基因组DNA中
【基金项目】
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十一五重大新药创制科技重大专项项目;
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目的 构建前列腺特异性膜抗原启动子调控表达的FCY1/TK双自杀基因表达栽体,观察其时前列腺癌细胞LNCaP、PC-3的杀伤作用及在荷瘤裸鼠体内的押瘤作用.方法 PCR扩增基因组DNA中PSMA启动子,利用基因重组的方法,替换真核表达栽体plRES中的CMV启动子,再将自杀基因FCY1和HSV-TK分别克隆于栽体plRES的两个多克隆位点,构建真核表达载体pPSMA-IRES-FCY1-TK.将该载体转染LNCaP、PC-3细胞,用RT-PCR的方法检测其转录,用MTT法检测前体药物5-氟胞嘧啶、丙氧鸟苷单一或联合使用对转染后的LNCaP、PC-3细胞的杀伤作用.将稳定转染双自杀基因表达载体的前列腺癌细胞注射入荷瘤裸鼠皮下,同时设立对照,计算肿瘤体积,观察生存状态.结果 成功构建pPSMA-IRES-FCY1-TK双自杀基因表达戴体,经脂质体转染LNCaP、PC-3细胞后,RT-PCR检:科到FCY1和TK基因均有转录.MTT法检测表明5-FC与GCV联合使用,其细胞生长抑制率明显高于单独使用5-FC、GCV(P
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