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摘要：目的分析研究金银花提取物在乳液化妆品中的抑菌活性及应用。方法调整金银花提取物的用量，使之与羟苯甲酯的复配物结合，利用防腐效能测试法研究其抑菌活性。结果质量分数分别为0.5%、0.25%的金银花提取物与0.25%的乙基己基甘油复配物应用于乳液化妆品时具有更好的抑菌效果。讨论金银花提取物的抑菌效果较好，广谱抑菌效能较为显著，是一种有效的植物防腐剂，值得开发并进一步研究。
关键词：金银花提取物；羟苯甲酯；乳液化妆品；抑菌活性
金银花正名为忍冬，出自《本草纲目》，因“初开为白色，后转为黄色”而得名。金银花是一种抗病原微生物，对大肠杆菌、副伤寒杆菌、金黄色葡萄球菌等病菌均能产生抑制作用。金银花能够抗炎解毒、疏热散邪、凉血止痢。为进一步了解金银花提取物的抑菌作用，笔者进行了如下研究。
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1菌种：Aspergillusbrasiliensis （ATCC 16404）；Stapylococcusaureus （ATCC 6538）；Escherichia coli （ATCC 8739）；Candida albicans（ATCC 10231）；Pseudomonasaeruginosa （ATCC 9027）。
1.1.2试剂：金银花提取物；咪唑烷基脲；对羟基苯甲酸甲酯；乙基己基甘油；马铃薯葡萄糖琼脂，BD；胰蛋白大豆肉汤，BD；沙氏葡萄糖肉汤，BD；胰蛋白大豆琼脂，BD；沙氏葡萄糖琼脂，BD；卵磷脂，国药；吐温20，国药；磷酸氢二钠，国药；磷酸二氢钾，国药；吐温80，国药；氯化钠，国药。
1.1.3仪器：Mettler-ToledoS20SevenEasypH计；AmscoLAB灭菌柜；SartoriusCPA3202分析天平；VITEK2全自动微生物分析系统；BINDERKMF70恒温恒湿培养箱；OlympusBX43显微镜；KokusanH-30R冷冻离心机；IKAVORTEX3涡旋振荡器；海尔DW-86-626超低温冰箱。
1.2实验方法
1.2.1乳液化妆品基础配方配制。按照图1所示配方设置油相组分为A、水相组分为B。A组包含油溶性乳化剂、液态油分、半固态/固态油分；B组包含水溶性乳化剂、保湿剂、去离子水、其他水溶性组分。将组分A加热至75-80℃，使之熔化，将组分B加热至70℃，将A与B进行混合处理，以70-75℃的温度进行预乳化，以70℃上下的温度进行均质乳化。使用酸度调节剂调节基质pH值时，可以选用柠檬酸钠、柠檬酸。将混合物冷却，在50℃时加入活性物或者香精，继而冷却至35-45℃，即可分装并加以储存。试验中，配方的pH值均保持在6.5。
图1
1.2.2防腐实验。（1）菌种制备。霉菌：选用专供实验的纯培养菌种，确定合理的数量，将其置于马铃薯葡萄糖的琼脂平板上，划线后，于20-25℃的温度环境中培养七天。适时观察，显微镜下孢子的形成率达95%后，要洗涤菌落的表面，这一过程使用无菌生理盐水，继而将孢子悬浮液收集起来，降低菌液浓度，稀释到107-108cfu/mL，备用。细菌以及酵母菌：选用专供实验的纯培养细菌菌种，制定合理的用量，将细菌菌种置于10mL无菌的胰蛋白大豆肉汤中，或者沙氏葡萄糖肉汤培养液中，将其混合均匀，控制温度为35℃上下，培养二十四小时。在新鲜菌液中提取1mL，混合以100mL的无菌胰蛋白大豆肉汤，也可以混合同等容量的沙氏葡萄糖肉汤，依旧在35℃的温度环境中进行二十四小时的扩大性培养。得到新的菌液后，对其施以10min的离心处理，控制速度为10000r/min。之后仍需用无菌生理盐水洗涤，稀释菌液，控制浓度为107-108cfu/mL，备用。鉴定菌种，通过全自动微生物分析儀对菌种进行测试，避免菌种在制备过程中受到污染。（2）样品接种。称取乳液化妆品50g，将0.5mL的菌种悬浮液加入其中，充分搅拌，使之混合均匀，避光储存，控制室温为20.0-25.0℃。（3）样品分析。取样分析的时间为接菌处理的当天、第七天、第十四天、第二十一天、第二十八天，方法为平板计数法，分析内容为测定微生物数量。控制温度为30-35℃，将细菌平板进行四十八小时的培养，设置20-25℃的温度，将霉菌和酵母菌平板进行七十二小时的培养。（4）判定标准。首先，细菌培养时间超过十四天，降落幅度要保证超过一百倍，第十四至二十八天之中，计数结果不能增长。其次，霉菌以及酵母菌培养的第十四天至二十八天，技术结果同样不能增长。上述条件均符合时，受试样品才可被判定为具有防腐性能，防腐效果显著。
2结果与分析
2.1用量对抑菌效果的影响
研究结果显示，金银花提取物含量在乳液化妆品基础配方中的占比越大，防腐效果就越好，效能更强。当质量分数为0.5%时，金银花提取物的防腐效果最好，抑菌活性显著提高。如表1所示，Y和M分别表示酵母菌、霉菌，B1、B2、B3则分别表示耐热大肠菌群、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌。
2.2金银花提取物与传统防腐剂复配使用的抑菌效果
选用质量分数为0.5%的金银花提取物，选用不同质量分数的羟苯甲酯，将其联合应用于乳液化妆品的基础配方中，研究结果显示，当羟苯甲酯的质量分数为0.2%时，复配使用的抑菌效果最佳，抑菌效能更为显著。
3结论
金银花的作用除药用外，美容、修复作用也很显著，其提取物具有抑菌活性[7]。使用金银花提取物做植物防腐剂，能够增加乳液化妆品的安全性，降低化妆品对皮肤的刺激，有利于护肤品配方的优化。
参考文献：
[1]翟凤艳，刘快，杜丽娟，等.金银花叶乙醇提取物对几种病原真菌的抑制作用[J].河南科技学院学报（自然科学版），2016，44（2）：40-44.
[2]梁芸，南蓬.金银花提取物在乳液化妆品中的抑菌活性及应用[J].广东化工，2016，43（23）：1-4.
[3]崔凤玲，陈岱宜，陈漫丽，等.金银花提取物在护肤品中抑菌作用的研究[J].香料香精化妆品，2017（3）：54-58.
[4]刘霭莎，洪启恩，冯兴江，等.诺丽果、种子和叶提取物抑菌活性及复合植物抑菌液配方筛选[J].食品工业科技，2017，38（14）：171-173.
[5]阮之阳，王兆梅，黎嘉嘉，等.金银花挥发油及残渣浸膏的抗菌活性研究[J].现代食品科技，2017（10）：77-82.
[6]谢新芳，刘潭，冯格，等.金银花叶提取物对奇异变形杆菌抑菌作用的研究[J].宜春学院学报，2017（12）：21-24.
[7]复方金银花外洗液及其单味药的体外透皮实验与抑菌活性研究[J].中国现代中药，2017，19（6）：798-803.
关键词：金银花提取物；羟苯甲酯；乳液化妆品；抑菌活性
金银花正名为忍冬，出自《本草纲目》，因“初开为白色，后转为黄色”而得名。金银花是一种抗病原微生物，对大肠杆菌、副伤寒杆菌、金黄色葡萄球菌等病菌均能产生抑制作用。金银花能够抗炎解毒、疏热散邪、凉血止痢。为进一步了解金银花提取物的抑菌作用，笔者进行了如下研究。
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1菌种：Aspergillusbrasiliensis （ATCC 16404）；Stapylococcusaureus （ATCC 6538）；Escherichia coli （ATCC 8739）；Candida albicans（ATCC 10231）；Pseudomonasaeruginosa （ATCC 9027）。
1.1.2试剂：金银花提取物；咪唑烷基脲；对羟基苯甲酸甲酯；乙基己基甘油；马铃薯葡萄糖琼脂，BD；胰蛋白大豆肉汤，BD；沙氏葡萄糖肉汤，BD；胰蛋白大豆琼脂，BD；沙氏葡萄糖琼脂，BD；卵磷脂，国药；吐温20，国药；磷酸氢二钠，国药；磷酸二氢钾，国药；吐温80，国药；氯化钠，国药。
1.1.3仪器：Mettler-ToledoS20SevenEasypH计；AmscoLAB灭菌柜；SartoriusCPA3202分析天平；VITEK2全自动微生物分析系统；BINDERKMF70恒温恒湿培养箱；OlympusBX43显微镜；KokusanH-30R冷冻离心机；IKAVORTEX3涡旋振荡器；海尔DW-86-626超低温冰箱。
1.2实验方法
1.2.1乳液化妆品基础配方配制。按照图1所示配方设置油相组分为A、水相组分为B。A组包含油溶性乳化剂、液态油分、半固态/固态油分；B组包含水溶性乳化剂、保湿剂、去离子水、其他水溶性组分。将组分A加热至75-80℃，使之熔化，将组分B加热至70℃，将A与B进行混合处理，以70-75℃的温度进行预乳化，以70℃上下的温度进行均质乳化。使用酸度调节剂调节基质pH值时，可以选用柠檬酸钠、柠檬酸。将混合物冷却，在50℃时加入活性物或者香精，继而冷却至35-45℃，即可分装并加以储存。试验中，配方的pH值均保持在6.5。
图1
1.2.2防腐实验。（1）菌种制备。霉菌：选用专供实验的纯培养菌种，确定合理的数量，将其置于马铃薯葡萄糖的琼脂平板上，划线后，于20-25℃的温度环境中培养七天。适时观察，显微镜下孢子的形成率达95%后，要洗涤菌落的表面，这一过程使用无菌生理盐水，继而将孢子悬浮液收集起来，降低菌液浓度，稀释到107-108cfu/mL，备用。细菌以及酵母菌：选用专供实验的纯培养细菌菌种，制定合理的用量，将细菌菌种置于10mL无菌的胰蛋白大豆肉汤中，或者沙氏葡萄糖肉汤培养液中，将其混合均匀，控制温度为35℃上下，培养二十四小时。在新鲜菌液中提取1mL，混合以100mL的无菌胰蛋白大豆肉汤，也可以混合同等容量的沙氏葡萄糖肉汤，依旧在35℃的温度环境中进行二十四小时的扩大性培养。得到新的菌液后，对其施以10min的离心处理，控制速度为10000r/min。之后仍需用无菌生理盐水洗涤，稀释菌液，控制浓度为107-108cfu/mL，备用。鉴定菌种，通过全自动微生物分析儀对菌种进行测试，避免菌种在制备过程中受到污染。（2）样品接种。称取乳液化妆品50g，将0.5mL的菌种悬浮液加入其中，充分搅拌，使之混合均匀，避光储存，控制室温为20.0-25.0℃。（3）样品分析。取样分析的时间为接菌处理的当天、第七天、第十四天、第二十一天、第二十八天，方法为平板计数法，分析内容为测定微生物数量。控制温度为30-35℃，将细菌平板进行四十八小时的培养，设置20-25℃的温度，将霉菌和酵母菌平板进行七十二小时的培养。（4）判定标准。首先，细菌培养时间超过十四天，降落幅度要保证超过一百倍，第十四至二十八天之中，计数结果不能增长。其次，霉菌以及酵母菌培养的第十四天至二十八天，技术结果同样不能增长。上述条件均符合时，受试样品才可被判定为具有防腐性能，防腐效果显著。
2结果与分析
2.1用量对抑菌效果的影响
研究结果显示，金银花提取物含量在乳液化妆品基础配方中的占比越大，防腐效果就越好，效能更强。当质量分数为0.5%时，金银花提取物的防腐效果最好，抑菌活性显著提高。如表1所示，Y和M分别表示酵母菌、霉菌，B1、B2、B3则分别表示耐热大肠菌群、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌。
2.2金银花提取物与传统防腐剂复配使用的抑菌效果
选用质量分数为0.5%的金银花提取物，选用不同质量分数的羟苯甲酯，将其联合应用于乳液化妆品的基础配方中，研究结果显示，当羟苯甲酯的质量分数为0.2%时，复配使用的抑菌效果最佳，抑菌效能更为显著。
3结论
金银花的作用除药用外，美容、修复作用也很显著，其提取物具有抑菌活性[7]。使用金银花提取物做植物防腐剂，能够增加乳液化妆品的安全性，降低化妆品对皮肤的刺激，有利于护肤品配方的优化。
参考文献：
[1]翟凤艳，刘快，杜丽娟，等.金银花叶乙醇提取物对几种病原真菌的抑制作用[J].河南科技学院学报（自然科学版），2016，44（2）：40-44.
[2]梁芸，南蓬.金银花提取物在乳液化妆品中的抑菌活性及应用[J].广东化工，2016，43（23）：1-4.
[3]崔凤玲，陈岱宜，陈漫丽，等.金银花提取物在护肤品中抑菌作用的研究[J].香料香精化妆品，2017（3）：54-58.
[4]刘霭莎，洪启恩，冯兴江，等.诺丽果、种子和叶提取物抑菌活性及复合植物抑菌液配方筛选[J].食品工业科技，2017，38（14）：171-173.
[5]阮之阳，王兆梅，黎嘉嘉，等.金银花挥发油及残渣浸膏的抗菌活性研究[J].现代食品科技，2017（10）：77-82.
[6]谢新芳，刘潭，冯格，等.金银花叶提取物对奇异变形杆菌抑菌作用的研究[J].宜春学院学报，2017（12）：21-24.
[7]复方金银花外洗液及其单味药的体外透皮实验与抑菌活性研究[J].中国现代中药，2017，19（6）：798-803.