【摘 要】
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将大豆中已克隆的一个新的SKIP基因(GmGBP1)构建到原核表达载体pGEX-6p-1上,导入大肠杆菌BL21(DE3)中,对其进行IPTG诱导。结果表明:在IPTG浓度为0.1 mmol.L-1,诱导时间为8 h,
【机 构】
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东北农业大学大豆生物学教育部重点实验室东北农业大学农业部大豆生物学与遗传育种重点实验室,
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将大豆中已克隆的一个新的SKIP基因(GmGBP1)构建到原核表达载体pGEX-6p-1上,导入大肠杆菌BL21(DE3)中,对其进行IPTG诱导。结果表明:在IPTG浓度为0.1 mmol.L-1,诱导时间为8 h,诱导温度为37℃时,重组蛋白得到表达,分子量大约为95 kDa,SDS-PAGE电泳结果表明重组蛋白主要以包涵体形式存在,用8 mol.L-1尿素对其进行溶解后经GST柱纯化,得到较好的纯化效果。
A new SKIP gene (GmGBP1) cloned in soybean was constructed into the prokaryotic expression vector pGEX-6p-1 and introduced into E. coli BL21 (DE3) for IPTG induction. The results showed that the recombinant protein was expressed at IPTG concentration of 0.1 mmol.L-1, induction time of 8 h and induction temperature of 37 ℃. The molecular weight of the recombinant protein was about 95 kDa. The results of SDS-PAGE showed that the recombinant protein mainly contained the inclusion body Form, with 8 mol.L-1 urea after its dissolution by GST column purification, get better purification effect.
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