【摘 要】
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目的:构建SUZ12基因过表达和敲减的恶性外周神经鞘瘤(MPNST)稳定细胞株并探讨其意义。方法:PCR合成SUZ12基因全长并设计合成SUZ12基因的3对特异性sgRNA干扰靶点序列(sgRNA-1
【机 构】
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天津医科大学病原生物学系,天津医科大学基础医学院,遵义医科大学珠海校区临床医学系,多伦多大学圣乔治校区
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(81672650).
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目的:构建SUZ12基因过表达和敲减的恶性外周神经鞘瘤(MPNST)稳定细胞株并探讨其意义。方法:PCR合成SUZ12基因全长并设计合成SUZ12基因的3对特异性sgRNA干扰靶点序列(sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3),构建重组表达质粒,转染293T细胞,包装慢病毒颗粒并用荧光法测定其滴度。确定慢病毒感染的最适MOI以及嘌呤霉素筛选的最适剂量,转染ST88-14细胞,构建过表达及敲减的MPNST稳定细胞株。荧光显微镜观察稳定株绿色荧光蛋白的表达情况,RT-qPCR在mRNA水平进行验证,M
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