观察百草枯（PQ）对人神经干细胞增殖的影响，探讨PQ基于DNA甲基化途径调控人神经干细胞增殖的作用机制。
方法以永生化的人神经干细胞系（ReNcell CX）为体外模型，通过间接免疫荧光法检测巢蛋白（Nestin）、β-微管蛋白III（β-tubulin III）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达，评估神经干细胞的自我更新和分化潜能；以终浓度0、5、25、50、100 μmol/L PQ作用细胞24 h，以及50 μmol/L PQ分别作用细胞6、12、24、48 h，四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞存活率；应用终浓度0、25、50、100 μmol/L PQ处理细胞24 h，采用Sox2/Brdu、Nestin/Brdu免疫荧光双标记法检测神经干细胞的增殖能力；采用DNA甲基化定量试剂盒检测细胞总甲基化水平；采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）和蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测DNA甲基转移酶（Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b）的转录和表达变化。
结果增殖期的干细胞能够大量表达Nestin蛋白，经诱导分化后，可获得表达相应特异性标志蛋白的神经元（β-tublin Ⅲ）和星形胶质细胞（GFAP）；MTT显示，与对照组比较，PQ呈剂量依赖性和时间依赖性抑制ReNcell CX人神经干细胞的活力；免疫荧光双标记染色显示，Brdu和Sox2均呈双阳性表达，各个染毒组的Brdu+/Sox2+双标阳性率随PQ浓度增加逐渐降低（P<0.05）；Brdu+/Nestin+双标阳性率也随PQ浓度增加而逐渐降低，其中50、100 μmol/L染毒组的双标阳性率较对照组明显降低，差异有统计学意义（P< 0.05）；DNA总甲基化水平检测结果显示，与对照组比较，25、50、100 μmol/L PQ染毒组细胞的总甲基化水平降低，差异有统计学意义（P<0.05）；Western blot结果显示，与对照组比较，50、100 μmol/L PQ染毒组的Dnmt1、Dnmt3a蛋白表达水平明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）；50、100 μmol/L染毒组的Dnmt3b蛋白表达水平明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；RT-PCR结果显示，与对照组比较，25、50、100 μmol/L PQ染毒组的Dnmt1、Dnmt3a基因表达水平降低，50、100 μmol/L PQ染毒组Dnmt3b基因表达水平明显升高（P<0.05）。
结论25、50和100μmol/L PQ可能通过降低DNA甲基化转移酶（Dnmt1、Dnmt3a）的蛋白表达和转录水平，抑制DNA甲基化反应的发生，进而抑制人神经干细胞的增殖。