【摘 要】
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抗除草剂、抗螟虫水稻在方便杂草治理、减少虫害损失方面具有重要的应用价值.事件特异性检测方法是监管转基因水稻的必需技术.本研究构建了损伤诱导启动子驱动抗螟虫基因杀虫
【机 构】
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中国科学院亚热带农业生态研究所/亚热带农业生态过程重点实验室,长沙410125中国科学院大学,北京100049;中国科学院亚热带农业生态研究所/亚热带农业生态过程重点实验室,长沙410125;中国科学
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抗除草剂、抗螟虫水稻在方便杂草治理、减少虫害损失方面具有重要的应用价值.事件特异性检测方法是监管转基因水稻的必需技术.本研究构建了损伤诱导启动子驱动抗螟虫基因杀虫蛋白基因(gene coding insecticidal crystal protein Cry1Ca,Cry1Ca#)和组成型启动子驱动抗除草剂基因5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶基因(gene coding 5-enolpyruvylshikimate 3-phosphate synthase,Epsps#)的植物表达载体,利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化籼稻(Oryza sativa subsp.indica)9K19-5,获得了单拷贝转化事件E1C9K-18,喷施草甘膦显示其具有良好的草甘膦抗性.利用高效热不对称交错PCR法(high efficient thermal asymmetric interlaced PCR,hiTAIL-PCR)扩增获得了转基因水稻E1C9K-18外源基因插入位点的右旁侧序列420 bp,其插在水稻基因组第4号染色体长臂的33189510位核苷酸残基之后.根据水稻参考基因组序列和T-DNA的左侧序列,设计引物扩增得到了613 bp的左旁侧序列,其插在水稻基因组第4号染色体长臂的33189480位核苷酸残基之前.外源基因插入导致水稻基因组上缺失了29个核苷酸残基.基于左、右旁侧序列,建立了转基因水稻E1C9K-18的事件特异性定性PCR检测方法,以及快速鉴定转基因后代植株外源基因型的三引物PCR检测方法.事件特异性PCR和三引物PCR检测方法将为转基因水稻E1C9K-18的研究和应用提供技术支撑.
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