大鼠ILK-RNAi慢病毒表达载体的构建及鉴定

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目的构建大鼠整合素连接激酶-RNAi(ILK-RNAi)慢病毒表达载体,为下一步干预研究细胞转分化及其信号通路奠定基础。方法针对大鼠ILK基因RNAi有效靶序列,合成4条干扰(KD)序列。与pGCSIL-GFP载体连接产生shILK-RNAi慢病毒载体。将连接产物转入制备完毕的细菌感受态细胞,PCR鉴定阳性克隆,测序验证。包装慢病毒,以绿色荧光蛋白(GFP)表达水平验证病毒滴度。慢病毒载体感染大鼠NRK-52E细胞后,RTPCR、WB检测及荧光显微镜观察ILK在其细胞中的表达。结果测序验证成功构建3条大鼠
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