【摘 要】
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目的:在毕赤酵母中分泌表达牛乳铁蛋白功能片段(BlfFf),并进行高密度发酵研究。方法:合成了密码子优化后的BlfFf,转入毕赤酵母GS115中重组表达并筛选抗性菌株,通过镍亲和层析
【基金项目】
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浙江省自然科学基金(LY12B06010)
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目的:在毕赤酵母中分泌表达牛乳铁蛋白功能片段(BlfFf),并进行高密度发酵研究。方法:合成了密码子优化后的BlfFf,转入毕赤酵母GS115中重组表达并筛选抗性菌株,通过镍亲和层析纯化BlfFf,以Western Blot、液质联用和ELISA对重组蛋白进行鉴定及检测。比较了5 L发酵罐生产中三种不同高密度发酵培养基对BlfFf生产的影响。结果:经鉴定,重组转化子正确表达了BlfFf。镍亲和层析中,150 mmol/L咪唑洗脱可得到电泳纯37 kDa的目标条带。在三种高密度发酵培养基中,RDM最优,诱导48 h,菌体湿细胞密度达到297 g/L,BlfFf表达量为38.1 mg/L。结论:成功利用构建的重组毕赤酵母以RDM培养基进行了BlfFf的高密度发酵生产,具有工业应用潜力。
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