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摘要：目的 对不同挂果期栝楼果实加工而成的瓜蒌进行总糖及还原糖的含量测定，并对其与质量的相关性进行研究。方法 采集栝楼同一产地不同挂果期的果实，后熟加工制成瓜蒌。用苯酚-硫酸法测定总糖的含量，用3，5-二硝基水杨酸法（DNS法）测定还原糖含量。结果 5、6、7、8月挂果制成的瓜蒌中总糖含量依次为33.01%、31.98%、31.28%、28.50%，还原糖含量依次为9.28%、8.38%、8.10%、6.37%；这些含量的高低与瓜蒌外观品质相一致。结论 5～7月挂果制成的瓜蒌糖分足、质量佳。总糖或还原糖的含量与瓜蒌的质量具有正相关性。
关键词：瓜蒌；挂果期；糖分；栝楼；质量评价
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）04-0057-03
葫芦科栝楼属植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.的干燥成熟果实为常用中药瓜蒌，性味甘、微苦、寒，具清热涤痰、宽胸散结、润燥滑肠之功效[1]。2010版《中华人民共和国药典》要求在“秋季果实成熟时，连果梗剪下，置通风处阴干”[1]。《中药大辞典》具体表述为“果皮表面有白粉并为淡黄色时采收，连果柄剪下，编连成串，堆积屋内2～3天，再挂于阴凉通风处晾干（2个月左右）”[2]。栝楼为多年生草质藤本植物，开花挂果持续时间长。据我们调查，我国主要瓜蒌产区从5月初至8月底有连绵4个多月的挂果期，一般于10月初采摘并进行后熟加工。挂果时间的早晚是否会引起瓜蒌质量的差异，尚未见文献报道，亦未见从化学成分含量的角度进行质量评价。鉴于瓜蒌具“焦糖气”[1]、传统“以糖味浓者为佳”[2]，可以认为，糖分含量高则瓜蒌的质量好。本研究对同一地段的栝楼果实进行了挂果期的标记及统一的采收和后熟加工，测定总糖和还原糖的含量，进行外观质量的评价，总结糖份含量与外观质量的相关性，为提高瓜蒌的质量提供依据。
1 仪器与试药
T6新世纪紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；电子分析天平（感量0.000 01 g，北京赛多利斯仪器系统有限公司）；FW100高速万能粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）；DHG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）；电热恒温水浴锅HHS（上海医疗器械五厂）；数显游标卡尺（量程0～150 mm，上海恒胜工具有限公司）。葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所，批号110833-200904）；3，5-二硝基水杨酸（DNS，国药集团化学试剂有限公司）；氢氧化钠、浓硫酸、丙三醇、石油醚（60～90 ℃）结晶苯酚等试剂均为分析纯。
植物为经过组织培养后的第3年生栝楼[3]，采用搭架种植技术，位于河南省安阳市宝莲寺镇（N 35°60?，E 114°21?，H 74 m）。在5、6、7、8月的15-20日期间，对正在开花的多个幼果进行无损伤标记，标记点的选取原则为分区随机布点法[4]。植物经巢志茂研究员鉴定为栝楼Trichosanthis kirilowii Maxim.。将有标记的果实于10月17日连藤剪下，去叶，将果实连藤编成1～2 m的长辫，每个果实之间成120°角，勿使果实相接，悬于室内，使其自然干燥[5]至第2年的6月15日。取无损伤、无发霉变质的成熟果实，观察外果皮颜色；剖开果实，观察和记录果瓤的色泽、焦糖气的有无，以及种子的情况。观察之后，整个果实以60 ℃烘烤4 h，粉碎，过40目筛，作为样品备用。
2 方法与结果
2.1 3，5-二硝基水杨酸试剂的配制
称取3.25 g DNS溶于少量水中，移入500 mL棕色容量瓶中，加2 mol/L氢氧化钠溶液162.5 mL和22.5 g丙三醇，以蒸馏水定容[6]。
2.2 5%苯酚溶液的配制
精密称取5 g苯酚，以蒸馏水定容于100 mL棕色容量瓶中。
2.3 葡萄糖对照品溶液的配制
精密称取烘干至恒重的葡萄糖适量，以蒸馏水定容，配制成0.103 3 mg/mL和1.202 mg/mL的对照品溶液。
2.4 供试品溶液的配制
精密称取0.2 g样品于100 mL平底烧瓶中，以20 mL石油醚加热回流30 min，放冷，滤过，待滤渣中的石油醚挥干后，滤渣连同滤纸置于烧瓶中，加入20 mL蒸馏水，沸水浴中放置2 h，放冷，滤过，蒸馏水洗涤3次，合并滤液于50 mL容量瓶中，定容。精密吸取1 mL作为测定还原糖的供试品溶液；另取1 mL，定容至25 mL，精密吸取1 mL作为测定总糖的供试品溶液。
2.5 标准曲线的绘制
2.5.1 总糖测定标准曲线 精密量取0.103 3 mg/mL葡萄糖对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL于8支20 mL刻度试管中，补充蒸馏水至2 mL，混匀，加入1 mL 5%苯酚溶液，摇匀，迅速加入5 mL浓硫酸，放置10 min，转入沸水浴中保持20 min。试管取出后以流水冷至室温，以空白管为对照，测定487 nm波长处的吸光度。以葡萄糖质量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。计算回归方程为Y=7.556X-0.025，r=0.999 6，在20.66～144.62 ?g范围内线性关系良好。
2.5.2 还原糖测定标准曲线 精密量取1.202 mg/mL的葡萄糖对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL于7个10 mL容量瓶中，补充蒸馏水至2 mL，混匀，加入1.5 mL DNS试剂，混匀后置沸水浴保持7 min。容量瓶取出后以流水冷至室温，以空白管为对照，测定540 nm波长处的吸光度。以葡萄糖质量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。计算回归方程为Y=0.475 3X-0.001 2，r=0.999 4，在0.24～1.44 mg范围内线性关系良好。 2.6 精密度试验
精密吸取1 mL总糖及还原糖的供试品溶液（批号3）各6份，分别按照“2.5.1”及“2.5.2”项下方法操作，测得苯酚-硫酸法和DNS法的精密度RSD分别为1.51%、1.23%，表明精密度良好。
2.7 重复性试验
取药材粉末（批号3）6份，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，分别按“2.5.1”及“2.5.2”项下方法测定总糖和还原糖的含量，计算RSD分别为1.99%、1.83%，表明重复性良好。
2.8 稳定性试验
精密吸取1 mL总糖及还原糖的供试品溶液（批号3）各1份，分别按“2.5.1”及“2.5.2”项下方法操作，于第0、10、20、30、60、90 min测定吸光度，计算RSD分别为2.91%、1.13%，表明样品显色后1.5 h内稳定。
2.9 加样回收率试验
称取已知总糖和还原糖含量的样品粉末（批号3）0.1 g共6份，精密称定，精确加入葡萄糖对照品溶液，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.5.1”及“2.5.2”项下方法操作，测定总糖和还原糖含量，计算回收率。回收率（%）=（C-A）/B×100%（式中A为供试品中总糖或还原糖质量，B为加入葡萄糖质量，C为实测总糖或还原糖质量）。总糖及还原糖平均加样回收率分别为102.5%、101.9%，RSD分别为1.98%、1.57%。
2.10 样品测定及数据处理
取样品0.2 g，精密称定，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.5.1”及“2.5.2”项下方法分别测定总糖和还原糖含量。结果以—x±s表示，使用SPSS19.0统计软件进行方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。结果见表1。
3 讨论
本研究对栝楼不同挂果期的果实进行后熟加工后的瓜蒌进行了总糖及还原糖的含量测定。结果表明，无论是总糖还是还原糖的含量，挂果期5、6、7月均与8月之间的差异均有统计学意义（P<0.05）。其中以5月份挂果的瓜蒌含量最高，6、7月份的略低，8月份显著下降。结果显示果实的生长期越长，总糖和还原糖的含量越高。
经调查，从5-7月，栝楼的座果率逐渐升高；果实后熟后，果皮呈橙黄色，糖分充足，果瓤与种子黏连成团，具焦糖气，种子成熟饱满，这些都是瓜蒌质量佳的外观现象。8月的座果率较低；果实干燥后未能得到充分的成熟，个小质轻，大部分果瓤呈浅棕色，无焦糖气，种子的成熟程度也低，显示瓜蒌的质量较差。这种质量优劣的现象与总糖、还原糖的含量高低呈正相关。因此，通过测定总糖或还原糖的高低可以判断瓜蒌的质量。可以认为，总糖的含量高于30%或还原糖的含量高于8%，说明瓜蒌的糖分充足，质量较佳。
随果实生长期的缩短，瓜蒌的含糖量逐渐降低，8月挂果的糖分含量显著下降。结果提示，在栝楼的田间种植上，应尽量选取种植早期挂果品种，或者采用适当的技术使栝楼尽早挂果。而对于8月挂果的栝楼，可适当延长采收期，或采用适当的农业技术促进果实尽早成熟。
据我们对栝楼主要种植地区的调查，浙江平湖、安徽潜山、江苏射阳、山东长清、河南安阳、山西稷山、河北安国等地大多在国庆节期间采收果实，早的在9月底就采收了。这比传统的“霜降前”[5]采收提前了20 d左右。因此，有必要按照传统的观点推迟栝楼果实的实际采收期，以提高瓜蒌的质量。
苯酚-硫酸法为测定糖类含量的经典方法之一[7]，其应用较多[8-10]，显色时苯酚用量、硫酸用量、显色时间、显色温度等都会影响到测定结果。本研究通过单因素试验，确定了最佳的显色条件。通过400～600 nm光谱扫描，确定最佳检测波长为487 nm。
DNS法为测定还原糖的经典方法[11]，具有简单、稳定、灵敏度高等优点。DNS法在测定还原糖的不同应用中[12-17]，其显色条件有较大差异。为了确定DNS法在测定瓜蒌还原糖中的最佳条件，对DNS试剂用量、显色温度、显色时间等进行了单因素考察，确定了最佳的显色条件。通过400～600 nm波长扫描，测定对照品和样品的最大吸收波长并排除DNS的干扰，选择540 nm为最佳测定波长。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：104.
[2] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上海：上海科学技术出版社，1986：1781.
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[13] 白雪媛，赵雨，刘海龙，等.不同产地人参中的总糖、还原糖和可溶性多糖含量的比较研究[J].中国现代应用药学，2012，29（1）：39-42.
[14] 舒馨，刘雄民，梁秋霞.3，5-二硝基水杨酸吸光光度法测定八角残渣中总糖、还原糖含量[J].食品工业科技，2010，31（6）：341-343.
[15] 孙伟伟，曹维强，王静.DNS法测定玉米秸秆中总糖[J].食品研究与开发，2006，27（6）：120-123.
[16] 王俊丽，聂国兴，李素贞，等.DNS法测定还原糖含量时最适波长的确定[J].河南农业科学，2010，39（4）：115-118.
[17] 章丽华，张利平，胡锦群，等.3，5-二硝基水杨酸比色法测定红毛五加中多糖的含量[J].中国中医药信息杂志，2008，15（5）：49-51.
（收稿日期：2012-09-08，编辑：华强）
关键词：瓜蒌；挂果期；糖分；栝楼；质量评价
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）04-0057-03
葫芦科栝楼属植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.的干燥成熟果实为常用中药瓜蒌，性味甘、微苦、寒，具清热涤痰、宽胸散结、润燥滑肠之功效[1]。2010版《中华人民共和国药典》要求在“秋季果实成熟时，连果梗剪下，置通风处阴干”[1]。《中药大辞典》具体表述为“果皮表面有白粉并为淡黄色时采收，连果柄剪下，编连成串，堆积屋内2～3天，再挂于阴凉通风处晾干（2个月左右）”[2]。栝楼为多年生草质藤本植物，开花挂果持续时间长。据我们调查，我国主要瓜蒌产区从5月初至8月底有连绵4个多月的挂果期，一般于10月初采摘并进行后熟加工。挂果时间的早晚是否会引起瓜蒌质量的差异，尚未见文献报道，亦未见从化学成分含量的角度进行质量评价。鉴于瓜蒌具“焦糖气”[1]、传统“以糖味浓者为佳”[2]，可以认为，糖分含量高则瓜蒌的质量好。本研究对同一地段的栝楼果实进行了挂果期的标记及统一的采收和后熟加工，测定总糖和还原糖的含量，进行外观质量的评价，总结糖份含量与外观质量的相关性，为提高瓜蒌的质量提供依据。
1 仪器与试药
T6新世纪紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；电子分析天平（感量0.000 01 g，北京赛多利斯仪器系统有限公司）；FW100高速万能粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）；DHG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）；电热恒温水浴锅HHS（上海医疗器械五厂）；数显游标卡尺（量程0～150 mm，上海恒胜工具有限公司）。葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所，批号110833-200904）；3，5-二硝基水杨酸（DNS，国药集团化学试剂有限公司）；氢氧化钠、浓硫酸、丙三醇、石油醚（60～90 ℃）结晶苯酚等试剂均为分析纯。
植物为经过组织培养后的第3年生栝楼[3]，采用搭架种植技术，位于河南省安阳市宝莲寺镇（N 35°60?，E 114°21?，H 74 m）。在5、6、7、8月的15-20日期间，对正在开花的多个幼果进行无损伤标记，标记点的选取原则为分区随机布点法[4]。植物经巢志茂研究员鉴定为栝楼Trichosanthis kirilowii Maxim.。将有标记的果实于10月17日连藤剪下，去叶，将果实连藤编成1～2 m的长辫，每个果实之间成120°角，勿使果实相接，悬于室内，使其自然干燥[5]至第2年的6月15日。取无损伤、无发霉变质的成熟果实，观察外果皮颜色；剖开果实，观察和记录果瓤的色泽、焦糖气的有无，以及种子的情况。观察之后，整个果实以60 ℃烘烤4 h，粉碎，过40目筛，作为样品备用。
2 方法与结果
2.1 3，5-二硝基水杨酸试剂的配制
称取3.25 g DNS溶于少量水中，移入500 mL棕色容量瓶中，加2 mol/L氢氧化钠溶液162.5 mL和22.5 g丙三醇，以蒸馏水定容[6]。
2.2 5%苯酚溶液的配制
精密称取5 g苯酚，以蒸馏水定容于100 mL棕色容量瓶中。
2.3 葡萄糖对照品溶液的配制
精密称取烘干至恒重的葡萄糖适量，以蒸馏水定容，配制成0.103 3 mg/mL和1.202 mg/mL的对照品溶液。
2.4 供试品溶液的配制
精密称取0.2 g样品于100 mL平底烧瓶中，以20 mL石油醚加热回流30 min，放冷，滤过，待滤渣中的石油醚挥干后，滤渣连同滤纸置于烧瓶中，加入20 mL蒸馏水，沸水浴中放置2 h，放冷，滤过，蒸馏水洗涤3次，合并滤液于50 mL容量瓶中，定容。精密吸取1 mL作为测定还原糖的供试品溶液；另取1 mL，定容至25 mL，精密吸取1 mL作为测定总糖的供试品溶液。
2.5 标准曲线的绘制
2.5.1 总糖测定标准曲线 精密量取0.103 3 mg/mL葡萄糖对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL于8支20 mL刻度试管中，补充蒸馏水至2 mL，混匀，加入1 mL 5%苯酚溶液，摇匀，迅速加入5 mL浓硫酸，放置10 min，转入沸水浴中保持20 min。试管取出后以流水冷至室温，以空白管为对照，测定487 nm波长处的吸光度。以葡萄糖质量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。计算回归方程为Y=7.556X-0.025，r=0.999 6，在20.66～144.62 ?g范围内线性关系良好。
2.5.2 还原糖测定标准曲线 精密量取1.202 mg/mL的葡萄糖对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL于7个10 mL容量瓶中，补充蒸馏水至2 mL，混匀，加入1.5 mL DNS试剂，混匀后置沸水浴保持7 min。容量瓶取出后以流水冷至室温，以空白管为对照，测定540 nm波长处的吸光度。以葡萄糖质量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。计算回归方程为Y=0.475 3X-0.001 2，r=0.999 4，在0.24～1.44 mg范围内线性关系良好。 2.6 精密度试验
精密吸取1 mL总糖及还原糖的供试品溶液（批号3）各6份，分别按照“2.5.1”及“2.5.2”项下方法操作，测得苯酚-硫酸法和DNS法的精密度RSD分别为1.51%、1.23%，表明精密度良好。
2.7 重复性试验
取药材粉末（批号3）6份，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，分别按“2.5.1”及“2.5.2”项下方法测定总糖和还原糖的含量，计算RSD分别为1.99%、1.83%，表明重复性良好。
2.8 稳定性试验
精密吸取1 mL总糖及还原糖的供试品溶液（批号3）各1份，分别按“2.5.1”及“2.5.2”项下方法操作，于第0、10、20、30、60、90 min测定吸光度，计算RSD分别为2.91%、1.13%，表明样品显色后1.5 h内稳定。
2.9 加样回收率试验
称取已知总糖和还原糖含量的样品粉末（批号3）0.1 g共6份，精密称定，精确加入葡萄糖对照品溶液，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.5.1”及“2.5.2”项下方法操作，测定总糖和还原糖含量，计算回收率。回收率（%）=（C-A）/B×100%（式中A为供试品中总糖或还原糖质量，B为加入葡萄糖质量，C为实测总糖或还原糖质量）。总糖及还原糖平均加样回收率分别为102.5%、101.9%，RSD分别为1.98%、1.57%。
2.10 样品测定及数据处理
取样品0.2 g，精密称定，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.5.1”及“2.5.2”项下方法分别测定总糖和还原糖含量。结果以—x±s表示，使用SPSS19.0统计软件进行方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。结果见表1。
3 讨论
本研究对栝楼不同挂果期的果实进行后熟加工后的瓜蒌进行了总糖及还原糖的含量测定。结果表明，无论是总糖还是还原糖的含量，挂果期5、6、7月均与8月之间的差异均有统计学意义（P<0.05）。其中以5月份挂果的瓜蒌含量最高，6、7月份的略低，8月份显著下降。结果显示果实的生长期越长，总糖和还原糖的含量越高。
经调查，从5-7月，栝楼的座果率逐渐升高；果实后熟后，果皮呈橙黄色，糖分充足，果瓤与种子黏连成团，具焦糖气，种子成熟饱满，这些都是瓜蒌质量佳的外观现象。8月的座果率较低；果实干燥后未能得到充分的成熟，个小质轻，大部分果瓤呈浅棕色，无焦糖气，种子的成熟程度也低，显示瓜蒌的质量较差。这种质量优劣的现象与总糖、还原糖的含量高低呈正相关。因此，通过测定总糖或还原糖的高低可以判断瓜蒌的质量。可以认为，总糖的含量高于30%或还原糖的含量高于8%，说明瓜蒌的糖分充足，质量较佳。
随果实生长期的缩短，瓜蒌的含糖量逐渐降低，8月挂果的糖分含量显著下降。结果提示，在栝楼的田间种植上，应尽量选取种植早期挂果品种，或者采用适当的技术使栝楼尽早挂果。而对于8月挂果的栝楼，可适当延长采收期，或采用适当的农业技术促进果实尽早成熟。
据我们对栝楼主要种植地区的调查，浙江平湖、安徽潜山、江苏射阳、山东长清、河南安阳、山西稷山、河北安国等地大多在国庆节期间采收果实，早的在9月底就采收了。这比传统的“霜降前”[5]采收提前了20 d左右。因此，有必要按照传统的观点推迟栝楼果实的实际采收期，以提高瓜蒌的质量。
苯酚-硫酸法为测定糖类含量的经典方法之一[7]，其应用较多[8-10]，显色时苯酚用量、硫酸用量、显色时间、显色温度等都会影响到测定结果。本研究通过单因素试验，确定了最佳的显色条件。通过400～600 nm光谱扫描，确定最佳检测波长为487 nm。
DNS法为测定还原糖的经典方法[11]，具有简单、稳定、灵敏度高等优点。DNS法在测定还原糖的不同应用中[12-17]，其显色条件有较大差异。为了确定DNS法在测定瓜蒌还原糖中的最佳条件，对DNS试剂用量、显色温度、显色时间等进行了单因素考察，确定了最佳的显色条件。通过400～600 nm波长扫描，测定对照品和样品的最大吸收波长并排除DNS的干扰，选择540 nm为最佳测定波长。
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（收稿日期：2012-09-08，编辑：华强）