【摘 要】
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试验利用Gateway技术构建含山羊SKIP基因的重组腺病毒载体。首先采用PCR扩增山羊SKIP基因连接入pcDNA3.1(+),将酶切回收的SKIP产物片段克隆至腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-2
【机 构】
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湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室
【基金项目】
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湖北省农业科学院青年科学基金项目(2011NKYJJ16);湖北省农业科技创新中心资助项目(2011-620-001-003)
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试验利用Gateway技术构建含山羊SKIP基因的重组腺病毒载体。首先采用PCR扩增山羊SKIP基因连接入pcDNA3.1(+),将酶切回收的SKIP产物片段克隆至腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-2获得重组质粒pYr-adshuttle-2-SKIP。从该重组质粒上,利用LR同源重组将SKIP-EGPF表达框转移至腺病毒骨架质粒pAd/PL-DEST,获得重组腺病毒质粒pAd-SKIP。该质粒经pacI线性化后转染HEK293A细胞包装病毒,获得重组腺病毒rAd-SKIP。重组腺病毒分别经酶切和PCR等方法进行鉴定。荧光显微镜观察转染效果。结果证实腺病毒载体中含有SKIP基因的目的片段,荧光显微镜发现该重组腺病毒能在C2C12细胞中高效表达。表明成功构建了同时表达SKIP蛋白和绿色荧光蛋白的重组腺病毒,为下一步开展关于SKIP基因的功能研究奠定了基础。
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