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摘要：采用单因素试验和正交试验对从苦参药材中提取氧化苦参碱的工艺进行了研究。试验结果表明，最适提取溶剂为乙醇溶液，最佳提取条件为：溶剂乙醇浓度为60％、料液比为1:30、温度为80℃、时间为85min，在此条件下提取氧化苦参碱得率达到6.58 mg·g－1，较优化前提高了2.8倍。
关键词：苦参；氧化苦参碱；提取工艺
中图分类号：R284.2
文献标识码：A
文章编号：1007-2349(2009)06-0055-02
苦参又名地槐、野槐、牛参等，为豆科槐属植物(Sophoraflavescens Ait)的干燥根，主产于我国山西、河南、河北及西北各省Ⅲ。苦参含有多种生物碱，氧化苦参碱是其中的主要有效药用成分。现代药理研究表明，氧化苦参碱具有抗炎、保肝、抗肿瘤、抗心律失常和免疫调节等功能。近年来有关苦参生物碱提取的研究报道多数集中在其分析检测上，所采用的提取方法多为分析检测其含量时的前处理方法，存在着工艺路线长、步骤多、效率低、能耗物耗高等问题，缺少生产应用价值。本研究采用单因素试验和正交试验探讨了溶剂种类、溶剂浓度、料液比、提取温度和时间对氧化苦参碱提取得率的影响，以期确定其最佳提取条件，为实际生产提供理论依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器 UV-2000紫外可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司)，BS110S电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)，PHS-3C酸度计(上海精密科学仪器有限公司)，R201D-Ⅱ旋转蒸发仪(上海申顺生物科技有限公司)，SHB-3循环水多用真空泵(郑州杜甫仪器厂)，JY96－Ⅱ超声波仪(宁波海曙祥鑫科教仪器有限公司)，DZKW-4恒温水浴锅(北京中兴仪器厂)，回流提取装置(自制)。
1.2 材料 氧化苦参碱对照标准品，中国药品生物制品检定所；苦参购自南阳市张仲景中药材市场；硅胶G预制板，山东省青岛海洋化工厂；乙醇、甲醇、三氯甲烷、氨水、氢氧化钠、磷酸二氢钾、碘、溴麝香草酚蓝等均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 标准曲线的绘制
2.1.1 标准品溶液的配制 精密称取干燥至恒重的氧化苦参碱标准品，以无水乙醇溶解，配制成每1mL含2.5mg的标准品溶液。
2.1.2 标准曲线的制备 吸取标准品溶液10、20、30、40、50μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿－甲醇－氨水(5:0.6:0.2)为展开剂展开，展距约10cm取出，晾干，碘蒸气显色。刮下氧化苦参碱斑点处硅胶，移入离心管中，加无水乙醇6mL，超声提取2次，每次15min，离心15min(2000r.min-1)，倾出上清液合并至50mL具塞三角烧瓶中，水浴蒸干。冷至室温后分别加入pH为7.6的0.0125％溴麝草酚兰缓冲溶液和氯仿各6mL，密塞，振摇2min，移入50mL分液漏斗中，静置30min，分出氧仿层于具塞试管中，以氯仿为空白，置入分光
光度计中在波长为410nm处测各浓度吸光度。以浓度(μg.mL-1)为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为：A=0.0096×－0.0853，r=0.999
2.2 提取液样品的测定
2.2.1 提取液样品的制备 苦参药材经干燥、粉碎，过20目筛。准确称取苦参药材粉末10.0g，按试验方案设计的条件回流提取3次，过滤，合并滤液。滤液经减压浓缩蒸干，残渣用无水乙醇溶解、定容至100mL，作为提取液样品备用。
2.2.2 测定方法 精密吸取提取液样品20μL，按2.1.2项的方法进行点样、展开、刮板、洗脱、显色、测定。由标准曲线得出样品的浓度，计算出样品相应的产品得率。
2.3 单因素试验及结果
2.3.1 提取溶剂的选择 准确称取苦参药材粉末5份，每份10.0g，在其它提取条件相同的情况下，分别用甲醇、氯仿、95％乙醇、水、0.2％盐酸为溶剂回流提取，按2，2项的方法测定，计算出氧化苦参碱得率(每1g
苦参药材经提取所得氧化苦参碱的mg数，mg·g-1)分别为1.91、1.44、2.35、1.82、2.06。结果表明，在所选用的5种提取溶剂中，乙醇溶剂提取的氧化苦参碱得率最高，为2.35mg·g－1。因此，乙醇为最适提取溶剂。
2.3.2 提取溶剂浓度的选择 准确称取苦参药材粉末7份，每份10.0g，在其它提取条件相同的情况下，分别用体积分数为35％、45％、55％、65％、75％、85％、95％的乙醇溶液为溶剂回流提取，按2.2项的方法测定，得出氧化苦参碱得率(mg·g－1)分别为2.19、2.34、2.57、2.76、2.65、2.51、2.36。由此可知，乙醇溶液为提取溶剂时，适宜的乙醇浓度为65％左右。
2.3.3 提取料液比的选择 准确称取苦参药材粉末6份，每份10.0g，采用65％乙醇溶液为溶剂，分别按料液比为1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30进行回流提取，按2.2项的方法测定，得出氧化苦参碱得率(mg·g－1)分别为2.17、2.53、2.75、2.78、2.83、2.85。由试验结果可以看出，适宜的提取料液比为1:25左右。
2.3.4 提取时间的选择 准确称取苦参药材粉末8份，每份10.0g，采用65％乙醇溶液为溶剂，料液比为1:25，提取时间(min)分别按30、40、50、60、70、80、90、100进行回流提取，按2.2项的方法测定，得出氧化苦参碱得率(mg·g-1)分别为2.87、3.59、3.72、3.97、4.35、4.49、4.46、4.48。由此可以看出，适宜的提取时间为80min左右。
2.3.5 提取温度的选择 准确称取苦参药材粉末8份，每份10.0g，采用上述试验所确定的提取溶剂、料液比和提取时间，提取温度(℃)分别按25、35、45、55、65、75、85、95进行回流提取，按2.2项的方法测定，得出氧化苦参碱得率(mg·g－1)分别为1.26、1.97、2.53、3.76、4.51、4.85、4.82、4.83。结果表明，适宜的提取温度为75℃左右。
2.4 正交试验及结果
2.4.1 正交试验设计 为确定最佳提取条件组合，进一步提高提取液的氧化苦参碱得率，根据单因素试验结果进行正交试验设计。选择设计的正交试验因素和水平见表1。
2.4.2 正交试验结果 准确称取苦参药材粉末9份，每份10.0g，按表1设计的因素和水平，采用L9(34)正交表安排试 验。按2.2项的方法测定，得出各试验处理的氧化苦参碱得率(mg·g-1)，结果见表2。
由表2正交试验结果的极差分析可以看出，各因素对氧化苦参碱得率影响的主次顺序为c>A>B>D；最佳提取条件为A1 B3 C3D3，在此条件下提取氧化苦参碱得率达到6.58mg·g-1。
2.4.3 正交试验结果的验证 准确称取苦参药材粉末3份，每份10.0g，按正交试验所确定的最佳提取条件A1 B3 C3D3进行3次平行提取试验，按2.2项的方法测定，得出氧化苦参碱得率(mg·g－1)分别为6.61、6.57、6.59。结果表明，所确定的最佳提取条件稳定可靠。
3 讨论
提取溶剂选择试验的结果表明，乙醇为溶剂时氧化苦参碱得率最高，而且乙醇具有毒性小、容易回收、提取液杂质含量少等特点，故选择乙醇作为氧化苦参索的最佳提取溶剂。
在单因素试验基础上经正交试验，确定了氧化苦参碱的最佳提取条件为A1 B3 C3D3，即提取溶剂乙醇浓度为60％、提取料液比为1:30、提取温度为80℃、提取时间为85min，在此条件下提取氧化苦参碱得率达到6.58mg·g－1，较优化前乙醇为提取溶剂时的氧化苦参碱得率2.35mg·g－1提高了2.8倍。
参考文献：
[1]丁景和，药用植物学[M]，上海：上海科技出版社。1990：149。
[2]王兵，王国俊，徐钧，氧化苦参碱对肿瘤诱导血管内皮细胞增殖的抑制作用[J]，实用肿瘤杂志，2Q00，15(5)：297。
[3]陈萦喧，李继强，曹民德，等，氧化苦参碱抗丙型肝炎病毒的体外试验研究[J]，中华肝脏病杂，2001，9(增刊)：12。
[4]秦泽莲，庄红明，刘燕，等，氧化苦参碱延长小鼠异体移植心肌存活期及其免疫机理的研究[J]，中西医结合杂志，1990，10(2)：99。
[5]崔九成，孙龚龚，佟珠丽，氧化苦参碱提取工艺研究[J]，陕西中医学院学报，2000，23(5)：51～52。
[6]张玉芬，纪明山，张良，等，苦参总碱不同提取方法的比较[J]，农药，2004，43(11)：501～503。
[7]张宏利，贺春玲，杨清娥。等，氧化苦参碱的提取分离及对小鼠的毒性研究[J]，天然产物研究与开发，2006，18：272～281。
[8]宋学华，党明，苦豆草总生物碱的含量测定[J]，中药草，1991，22(10)：444。
关键词：苦参；氧化苦参碱；提取工艺
中图分类号：R284.2
文献标识码：A
文章编号：1007-2349(2009)06-0055-02
苦参又名地槐、野槐、牛参等，为豆科槐属植物(Sophoraflavescens Ait)的干燥根，主产于我国山西、河南、河北及西北各省Ⅲ。苦参含有多种生物碱，氧化苦参碱是其中的主要有效药用成分。现代药理研究表明，氧化苦参碱具有抗炎、保肝、抗肿瘤、抗心律失常和免疫调节等功能。近年来有关苦参生物碱提取的研究报道多数集中在其分析检测上，所采用的提取方法多为分析检测其含量时的前处理方法，存在着工艺路线长、步骤多、效率低、能耗物耗高等问题，缺少生产应用价值。本研究采用单因素试验和正交试验探讨了溶剂种类、溶剂浓度、料液比、提取温度和时间对氧化苦参碱提取得率的影响，以期确定其最佳提取条件，为实际生产提供理论依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器 UV-2000紫外可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司)，BS110S电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)，PHS-3C酸度计(上海精密科学仪器有限公司)，R201D-Ⅱ旋转蒸发仪(上海申顺生物科技有限公司)，SHB-3循环水多用真空泵(郑州杜甫仪器厂)，JY96－Ⅱ超声波仪(宁波海曙祥鑫科教仪器有限公司)，DZKW-4恒温水浴锅(北京中兴仪器厂)，回流提取装置(自制)。
1.2 材料 氧化苦参碱对照标准品，中国药品生物制品检定所；苦参购自南阳市张仲景中药材市场；硅胶G预制板，山东省青岛海洋化工厂；乙醇、甲醇、三氯甲烷、氨水、氢氧化钠、磷酸二氢钾、碘、溴麝香草酚蓝等均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 标准曲线的绘制
2.1.1 标准品溶液的配制 精密称取干燥至恒重的氧化苦参碱标准品，以无水乙醇溶解，配制成每1mL含2.5mg的标准品溶液。
2.1.2 标准曲线的制备 吸取标准品溶液10、20、30、40、50μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿－甲醇－氨水(5:0.6:0.2)为展开剂展开，展距约10cm取出，晾干，碘蒸气显色。刮下氧化苦参碱斑点处硅胶，移入离心管中，加无水乙醇6mL，超声提取2次，每次15min，离心15min(2000r.min-1)，倾出上清液合并至50mL具塞三角烧瓶中，水浴蒸干。冷至室温后分别加入pH为7.6的0.0125％溴麝草酚兰缓冲溶液和氯仿各6mL，密塞，振摇2min，移入50mL分液漏斗中，静置30min，分出氧仿层于具塞试管中，以氯仿为空白，置入分光
光度计中在波长为410nm处测各浓度吸光度。以浓度(μg.mL-1)为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为：A=0.0096×－0.0853，r=0.999
2.2 提取液样品的测定
2.2.1 提取液样品的制备 苦参药材经干燥、粉碎，过20目筛。准确称取苦参药材粉末10.0g，按试验方案设计的条件回流提取3次，过滤，合并滤液。滤液经减压浓缩蒸干，残渣用无水乙醇溶解、定容至100mL，作为提取液样品备用。
2.2.2 测定方法 精密吸取提取液样品20μL，按2.1.2项的方法进行点样、展开、刮板、洗脱、显色、测定。由标准曲线得出样品的浓度，计算出样品相应的产品得率。
2.3 单因素试验及结果
2.3.1 提取溶剂的选择 准确称取苦参药材粉末5份，每份10.0g，在其它提取条件相同的情况下，分别用甲醇、氯仿、95％乙醇、水、0.2％盐酸为溶剂回流提取，按2，2项的方法测定，计算出氧化苦参碱得率(每1g
苦参药材经提取所得氧化苦参碱的mg数，mg·g-1)分别为1.91、1.44、2.35、1.82、2.06。结果表明，在所选用的5种提取溶剂中，乙醇溶剂提取的氧化苦参碱得率最高，为2.35mg·g－1。因此，乙醇为最适提取溶剂。
2.3.2 提取溶剂浓度的选择 准确称取苦参药材粉末7份，每份10.0g，在其它提取条件相同的情况下，分别用体积分数为35％、45％、55％、65％、75％、85％、95％的乙醇溶液为溶剂回流提取，按2.2项的方法测定，得出氧化苦参碱得率(mg·g－1)分别为2.19、2.34、2.57、2.76、2.65、2.51、2.36。由此可知，乙醇溶液为提取溶剂时，适宜的乙醇浓度为65％左右。
2.3.3 提取料液比的选择 准确称取苦参药材粉末6份，每份10.0g，采用65％乙醇溶液为溶剂，分别按料液比为1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30进行回流提取，按2.2项的方法测定，得出氧化苦参碱得率(mg·g－1)分别为2.17、2.53、2.75、2.78、2.83、2.85。由试验结果可以看出，适宜的提取料液比为1:25左右。
2.3.4 提取时间的选择 准确称取苦参药材粉末8份，每份10.0g，采用65％乙醇溶液为溶剂，料液比为1:25，提取时间(min)分别按30、40、50、60、70、80、90、100进行回流提取，按2.2项的方法测定，得出氧化苦参碱得率(mg·g-1)分别为2.87、3.59、3.72、3.97、4.35、4.49、4.46、4.48。由此可以看出，适宜的提取时间为80min左右。
2.3.5 提取温度的选择 准确称取苦参药材粉末8份，每份10.0g，采用上述试验所确定的提取溶剂、料液比和提取时间，提取温度(℃)分别按25、35、45、55、65、75、85、95进行回流提取，按2.2项的方法测定，得出氧化苦参碱得率(mg·g－1)分别为1.26、1.97、2.53、3.76、4.51、4.85、4.82、4.83。结果表明，适宜的提取温度为75℃左右。
2.4 正交试验及结果
2.4.1 正交试验设计 为确定最佳提取条件组合，进一步提高提取液的氧化苦参碱得率，根据单因素试验结果进行正交试验设计。选择设计的正交试验因素和水平见表1。
2.4.2 正交试验结果 准确称取苦参药材粉末9份，每份10.0g，按表1设计的因素和水平，采用L9(34)正交表安排试 验。按2.2项的方法测定，得出各试验处理的氧化苦参碱得率(mg·g-1)，结果见表2。
由表2正交试验结果的极差分析可以看出，各因素对氧化苦参碱得率影响的主次顺序为c>A>B>D；最佳提取条件为A1 B3 C3D3，在此条件下提取氧化苦参碱得率达到6.58mg·g-1。
2.4.3 正交试验结果的验证 准确称取苦参药材粉末3份，每份10.0g，按正交试验所确定的最佳提取条件A1 B3 C3D3进行3次平行提取试验，按2.2项的方法测定，得出氧化苦参碱得率(mg·g－1)分别为6.61、6.57、6.59。结果表明，所确定的最佳提取条件稳定可靠。
3 讨论
提取溶剂选择试验的结果表明，乙醇为溶剂时氧化苦参碱得率最高，而且乙醇具有毒性小、容易回收、提取液杂质含量少等特点，故选择乙醇作为氧化苦参索的最佳提取溶剂。
在单因素试验基础上经正交试验，确定了氧化苦参碱的最佳提取条件为A1 B3 C3D3，即提取溶剂乙醇浓度为60％、提取料液比为1:30、提取温度为80℃、提取时间为85min，在此条件下提取氧化苦参碱得率达到6.58mg·g－1，较优化前乙醇为提取溶剂时的氧化苦参碱得率2.35mg·g－1提高了2.8倍。
参考文献：
[1]丁景和，药用植物学[M]，上海：上海科技出版社。1990：149。
[2]王兵，王国俊，徐钧，氧化苦参碱对肿瘤诱导血管内皮细胞增殖的抑制作用[J]，实用肿瘤杂志，2Q00，15(5)：297。
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[4]秦泽莲，庄红明，刘燕，等，氧化苦参碱延长小鼠异体移植心肌存活期及其免疫机理的研究[J]，中西医结合杂志，1990，10(2)：99。
[5]崔九成，孙龚龚，佟珠丽，氧化苦参碱提取工艺研究[J]，陕西中医学院学报，2000，23(5)：51～52。
[6]张玉芬，纪明山，张良，等，苦参总碱不同提取方法的比较[J]，农药，2004，43(11)：501～503。
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[8]宋学华，党明，苦豆草总生物碱的含量测定[J]，中药草，1991，22(10)：444。