【摘 要】
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目的优化在阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导下将小鼠NF-κB的小干扰RNA(siRNA)转染入EOMA细胞时的转染条件.方法将1.0 μl和1.5 μl的LipofectamineTM2000与20 pmol、30
【机 构】
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徐州医学院附属医院心胸外科,苏州大学附属第一医院心血管外科器官移植研究室
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目的优化在阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导下将小鼠NF-κB的小干扰RNA(siRNA)转染入EOMA细胞时的转染条件.方法将1.0 μl和1.5 μl的LipofectamineTM2000与20 pmol、30 pmol、40 pmol、50 pmol 、60 pmol的带荧光标记的siRNA分别组合,制备成相应的转染混合物,转染小鼠血管瘤内皮细胞(EOMA细胞),于转染24 h后在荧光显微镜下计数阳性细胞率、MTT法检测各转染条件下EOMA的细胞活性.结果在siRNA量相同的情况下,分别采用1.0 μl和1.5 μl的LipofectamineTM2000进行转染其转染效率、细胞毒性无明显差异(P＞0.05);转染混合物中siRNA浓度为50 pmol时,转染效率最高达到86%,继续增加siRNA的浓度,转染效率提高并不明显;siRNA浓度为60 pmol时转染混合物表现出较高的细胞毒性.结论以1.0 μl LipofectamineTM2000与50 pmol的siRNA组成转染混合物可以实现对EOMA细胞高效转染并保持较高的细胞活性.
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