【摘 要】
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【目的】原核表达热带念珠菌（Candida tropicalis MYA-3404）β-葡聚糖合成酶（KRE9）,并进行酶比活力测定,为研究其结构和生物学功能提供参考。【方法】提取热带念珠菌DNA,PCR扩增K
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31071922,31572264);河南省科技攻关项目(162102310404)
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【目的】原核表达热带念珠菌（Candida tropicalis MYA-3404）β-葡聚糖合成酶（KRE9）,并进行酶比活力测定,为研究其结构和生物学功能提供参考。【方法】提取热带念珠菌DNA,PCR扩增KRE9基因,构建其原核表达载体pET28a-KRE9后转化大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）感受态细胞,通过IPTG诱导表达及组氨酸（His）标签纯化树脂亲和柱纯化获得融合蛋白KRE9,并利用3,5-二硝基水杨酸（DNS）显色法测定其比活力。【结果】克隆获得的KRE9基因全长816 bp,编码271个氨基酸,与参考基因序列（GenBank登录号XM002547984）的相似性高达99.75%。将其原核表达载体pET28a-KRE9转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,通过诱导表达及纯化获得重组蛋白KRE9,经SDS-PAGE检测,发现其纯度较高,大小约35 k D。Western blotting鉴定结果显示,重组蛋白KRE9能与抗His抗体发生特异性结合。重组蛋白KRE9比活力为9.169×104U/mg。【结论】重组蛋白KRE9具有良好的特异性和较高β-葡聚糖合成酶活性,可用于其结构和生物学功能研究。
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