论文部分内容阅读
目的 探讨细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对高糖状态下肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响.方法 体外培养人肾小球系膜细胞,应用脂质体2000分别转染pCR3.1-SOCS-1表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆.分别采用低糖(5.5 mmol/L)、高糖(30 mmol/L)、低糖+甘露醇(24.5 mmol/L甘露醇)和JAK-STAT信号通路抑制剂AG490(10 μmol/L)进行刺激.Western印迹检测系膜细胞SOCS-1、信号转导和转录活化因子1、3(STAT1、STAT3)及其磷酸化蛋白(p-STATI、p-STAT3)的表达.ELISA法和放免法测定细胞上清液中MCP-1、FN和Ⅳ型胶原的含量.RT-PCR法检测SOCS-1和MCP-1mRNA的表达.结果 高糖刺激系膜细胞SOCS-1蛋白和mRNA表达呈时间依赖性变化,4 h表达达到峰值,然后逐渐减低,24 h达基线水平.与低糖组相比,高糖组系膜细胞STAT1和STAT3磷酸化水平显著上调(P＜0.01);MCP-1 mRNA水平表达显著上调(0.39±0.05)比(0.16±0.02),P＜0.01];上清液中MCP-1[(459±67)比(241±19)ng/L]、FN[(5.84±0.61)比(3.41±0.31)mg/L]和Ⅳ型胶原[(16.45±2.30)比(9.56±1.52)μg/L]含量均显著增加(均P＜0.01).与空载体对照组相比,SOCS-1过表达组系膜细胞STAT1和STAT3的磷酸化水平显著下降(P＜0.05);MCP-1 mRNA表达下调[(0.34±0.04)比(0.42±0.05),P＜0.05];上清液中MCP-1[(387±47)比(463±56)ng/L]、FN[(4.61±0.57)比(5.76±0.74)mg/L]和Ⅳ型胶原[(13.4±2.32)比(17.1±2.57)μg/L]含量显著减少(均P＜0.05).与高糖组相比,AG490组系膜细胞MCP-1 mRNA(0.31±0.04)表达显著下调;上清液中MCP-1[(361±53)ng/L]、FN[(5.46±0.71)mg/L]和Ⅳ型胶原[(15.2±1.97)μg/L]含量均减少.结论 SOCS-1过表达抑制高糖状态下肾小球系膜细胞MCP-1及细胞外基质的分泌可能部分是通过影响STAT1和STAT3的激活而实现.