【摘 要】
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目的 研究骨髓间充质干细胞缺氧后细胞死亡情况及促红细胞生成素信号通路成分的表达改变.方法 从Wistar大鼠股骨提取骨髓分离培养骨髓间充质干细胞并在体外扩增.取第4至6代接
【机 构】
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杭州,美国南卡罗来纳医科大学病理系
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目的 研究骨髓间充质干细胞缺氧后细胞死亡情况及促红细胞生成素信号通路成分的表达改变.方法 从Wistar大鼠股骨提取骨髓分离培养骨髓间充质干细胞并在体外扩增.取第4至6代接近融合的骨髓间充质干细胞置于氧浓度为0.5%的缺氧箱内培养24、48、72、96 h后行台盼蓝染色计数阳性细胞并提取蛋白行Western blot检测促红细胞生成素、促红细胞生成素受体、HIF-1α、ERK、磷酸化ERK表达改变,另取0.5%缺氧培养48 h的细胞免疫荧光染色观察EPO表达改变,Hoechst 33342染细胞核.结果 常氧浓度培养对照组骨髓间充质细胞组台盼蓝染色阳性率为3.5%±0.4%,缺氧培养24、48、72、96 h组分别为3.9%±0.2%、5.0%±0.4%、5.9%±0.5%、7.1%±0.5%.Western blot和免疫荧光染色发现EPO表达在缺氧48 h后开始明显上调.EPOR表达在缺氧后24 h即开始显著上调且倍数更高.总ERK在对照组和不同缺氧时间组表达改变不明显,但HIF-1α和磷酸化ERK缺氧24 h后即上调,72 h达高峰.结论 骨髓间充质干细胞对单纯缺氧损害较耐受,缺氧后促红细胞生成素信号通路的主要成分均显著上调,提示促红细胞生成素信号通路在骨髓间充质干细胞耐缺氧和旁分泌保护能力中起着重要作用.
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