【摘 要】
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为探讨干细胞转录因子与穿膜肽融合表达蛋白对水牛体细胞诱导重编程的可行性,本试验对水牛iPS细胞转录因子Sox2与细胞穿膜肽HIV TAT进行融合表达,以获得具有自主穿膜功能的So
【机 构】
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广西大学动物科学技术学院亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室; 西南大学荣昌校区;
【基金项目】
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农业部重大专项资助项目(2008ZX08007-003);国家自然科学基金资助项目(30960251);博士后基金资助项目
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为探讨干细胞转录因子与穿膜肽融合表达蛋白对水牛体细胞诱导重编程的可行性,本试验对水牛iPS细胞转录因子Sox2与细胞穿膜肽HIV TAT进行融合表达,以获得具有自主穿膜功能的Sox2蛋白,建立非转基因水牛iPS生产技术体系。首先人工合成了HA2-TAT序列,并将pET-32a(+)质粒改造为pET-HA2-TAT基础表达载体,再通过双酶切定向克隆将水牛Sox2基因插入pET-HA2-TAT得到原核表达载体pET-NLS-Sox2-TAT;重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳和Western blot检测融合蛋白表达,再用Ni 2+柱进行纯化融合蛋白。结果表明,成功表达了融合蛋白HA2-TAT(24 400)和NLS-Sox2-TAT(57 700);纯化蛋白NLS-Sox2-TAT在咪唑浓度为365.30mmol/L时,出现蛋白洗脱峰,经Western blot验证表达的融合蛋白具有免疫原性。
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