探讨早幼粒细胞白血病(promyelocyte leukemia,PML)蛋白在髓系白血病中的表达及其对人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞增殖的影响。
方法采用实时荧光定量PCR技术检测了30例慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者及24名健康对照者外周血单个核细胞中PML mRNA水平的差异。构建PML的真核表达载体,转染K562细胞后筛选出稳定表达PML的细胞株,以稳定表达空载体的细胞为对照。四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术分别检测PML过表达对细胞增殖和细胞周期的影响,并进一步用反转录-PCR(RT-PCR)和蛋白质印迹技术(Western blot)检测增殖相关因子c-myc和p27kip1(p27)mRNA水平以及蛋白表达水平的改变。最后检测了CML患者及健康对照者外周血单个核细胞中c-myc和p27 mRNA水平的差异。
结果CML患者外周血单个核细胞中PML mRNA表达水平(ΔCt=9.02±0.74)明显低于健康对照组(ΔCt=7.91±0.34),差异有统计学意义(t=5.07,P<0.001)。PML过表达能明显抑制K562细胞增殖,引起细胞周期G0/G1期阻滞。PML稳定表达的K562细胞中,c-myc的mRNA和蛋白表达水平降低,p27的m RNA和蛋白表达水平升高。CML患者外周血单个核细胞中c-myc的mRNA表达水平(ΔCt=7.13±0.43)显著高于健康对照组(ΔCt=9.35±0.82),差异有统计学意义(t=6.78,P<0.001),而p27的mRNA表达水平(ΔCt=4.56±0.58)则显著低于健康对照组(ΔCt=3.29±0.92),差异有统计学意义(t=2.93,P<0.01)。
结论PML在CML患者中低表达,PML可能通过调节cmyc和p27的表达从而抑制白血病细胞的增殖。(中华检验医学杂志,2013,36:395-399)