目的构建LIF慢病毒载体,转染人脂肪间充质干细胞,以此获得高表达LIF的人脂肪间充质干细胞,为LIF在人脂肪间充质干细胞介导的免疫调节效应机制研究中奠定基础。方法以PCR扩增得到LIF基因序列,采用质粒重组技术获得载有LIF基因的重组质粒,然后用重组质粒包装慢病毒。用胶原酶消化法分离培养人脂肪间充质干细胞,然后将慢病毒转染人脂肪间充质干细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,采用流式细胞技术检测慢病毒转染率,RT-PCR及Western blot技术检测LIF的表达水平,最后经SPSS 13.0软件对数据进行统计学分析,计量资料均以(x±s)表示,组间均数比较采用成对样本t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果通过PCR技术扩增得到LIF基因序列,并且成功构建带有LIF基因的重组质粒,重组质粒经限制性内切酶双酶切鉴定,得到大小为608 bp左右的条带,大小与LIF基因序列匹配,通过重组质粒转染293T细胞后获得慢病毒颗粒,滴度检测达1×108TU/ml。成功分离得到纯度高的h ASCs,慢病毒转染h ASCs后,流式细胞仪检测慢病毒转染率可达90%。RT-PCR及Western blot结果经统计学分析提示,转染后LIF的表达水平明显升高。结论携带人LIF基因的慢病毒载体可以有效转染h ASCs,并且表达LIF。