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[摘要] 目的 分析乳腺癌17号染色体多体在HER-2基因状态及临床病理特征中的意义。 方法 应用荧光原位杂交 （FISH）技术检测186例浸润性乳腺癌患者石蜡切片中HER-2基因扩增与17号染色体多体情况，并分析17号染色体多体与HER-2基因扩增及各临床病理特征的关系。 结果 186例样本中，17号染色体多体比例为43.0%（80/186），其中HER-2基因扩增组66.3% （53/80），HER-2基因未扩增组25.5% （27/106），前者显著高于后者 （x2=30.929，P=0.000）；17号染色体多体与肿瘤大小及肿瘤分级显示相关（r=-0.188，P=0.001；r=0.159，P=0.03），而与年龄、Ki67、淋巴结转移﹑ER、PR表达及ER/PR状态无关。 结论 17号染色体多体与HER-2基因扩增者相关；并且可能提示乳腺癌患者预后不良。
[关键词] 乳腺肿瘤；HER-2基因；17号染色体；荧光原位杂交
[中图分类号] R737.9 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）19-33-03
乳腺癌原癌基因HER-2（人表皮生长因子受体2）的状态与乳腺癌患者预后及应用靶向治疗药物密切相关[1-2]。应用荧光原位杂交（FISH）技术能很好的反应HER-2基因扩增状态，但在检测的过程中常会出现17号染色体（CSP17）多体性，而17号染色体多体是否可以判定患者预后、指导术后放化疗、及其和HER-2基因状态的关系是近年学者研究的热点。本研究主要应用FISH技术检测186例浸润性乳腺癌患者的HER-2基因及17号染色体多体性，旨在探讨17号染色体多体与HER-2基因扩增及乳腺癌患者临床病理特征关系。
1 对象与方法
1.1 研究对象
2010年11月～2013年5月在我科进行FISH 检测的浸润性乳腺癌患者186例，年龄26～69岁。石蜡切片3μm，分别用于FISH检测与IHC 检测。
1.2 试剂与探针
IHC检测用基因科技 （上海） 有限公司抗体，ER 克隆号：SP1；PR 克隆号：SP2； Ki-67 克隆号：MIB-I。FISH检测使用北京金普嘉公司HER-2基因扩增试剂盒。
1.3 方法
1.3.1 IHC技术及结果判定 采用免疫组化evision法进行检测。ER、PR棕色阳性定位于细胞核内：（-）<10%表达阳性；（+） 10%～30%表达阳性；（++）：30%～50%表达阳性；（+++）>50%表达阳性。Ki67以<50%为低表达，以≥50%为高表达[3]。
1.3.2 FISH技术及结果判定 按照北京金普嘉公司HER-2基因扩增试剂盒说明书操作。FISH结果判定： （1） 红信号明显成簇成团：判定为簇状扩增；（2） 若不是 （1） 的情况，计数30个细胞计算Ratio值：Ratio<1.8为阴性；Ratio>2.2为阳性；Ratio介于1.8～2.2之间时，增加计数细胞。以绿色信号≥3判定为17号染色体多体[4]。
1.4 统计学方法
用SPSS11.5统计学分析软件分析，组间比较用x2检验，秩和检验及Spearman等级相关分析，P<0.05为差异有统计学意 义。
2 结果
2.1 17号染色体多体与HER-2基因扩增的相关性
186例浸润性乳腺癌患者标本中，17号染色体多体的比例为 43.0%（80/186），其中HER-2基因扩增组66.3% （53/80），HER-2基因未扩增组25.5%（27/106），前者显著高于后者（x2=30.929，P=0.000）。见表1。
2.2 17号染色体多体与各临床病理特征联系
不同肿瘤分级及肿瘤大小的17号染色体倍体性分布不同，差异具有统计学意义 （x2=16.221，P=0.000；x2=6.549，P=0.038）。17号染色体多体与肿瘤分级呈正相关（r=0.159 P=0.03），与肿瘤大小呈负相关 （r=-0.188，P=0.001），而与年龄、Ki67、淋巴结转移﹑ER、PR表达及ER/PR状态无关（P>0.05）。见表2。
3 讨论
人类大多数肿瘤都有基因组不稳定性的遗传学特征[5]，其中的染色体不稳定（chromosomal instability，CIN）主要是由于保持细胞基因组完整性的染色体不稳定基因突变引起[6]。乳腺癌作为女性肿瘤死亡原因的第二位[7]，其17号染色体变异是近年研究的热点，其不仅可能与HER-2基因扩增相关，还可能是评价乳腺癌预后，指导治疗的独立因素。
本研究结果中，17号染色体多体比例43%，与王富文等[8]（38%）及吕亚莉等[9] （45.9%）报道的存在不同差异，但结果基本一致，这与各个统计资料差异有关。17号染色体多体在HER-2基因扩增组的分布 （66.3%） 显著高于HER-2基因未扩增组 （25.5%）（P=0.000），同大多数学者报道一致[9-11]，提示HER-2基因扩增的患者17号染色体变异更显著，这可能是很多学者认为17号染色体多体与乳腺癌患者预后不良有关的原因，分析其机制可能是（1）：CSP17多体者HER-2基因拷贝数改变继而使HER-2蛋白增多，致患者预后不良。（2）[12]：CIN基因突变，其中Raf基因突变后导致一种肿瘤转移抑制蛋白过度消耗而与乳腺癌患者预后相关。
有研究[13]报道，HER-2基因无扩增但17号染色体多体者与既无HER-2基因扩增也无17号染色体多体者比较，其组织学分级更高、肿瘤分级更高及雌孕激素阴性阴性率更高，而这些临床病理特征往往提示该患者预后不良，也有研究者报道[14]乳腺癌中染色体倍体性与肿瘤细胞分化程度﹑存活率及复发率无关。 本研究进一步分析了17号染色体多体与临床病理特征的相关性，结果显示17号染色体多体在肿瘤分级中分布具有显著差异且两者呈正相关 （P<0.05），肿瘤分级越高，17号染色体多体分布越多，陈红等[15]报道17号染色体多体与乳腺癌淋巴结转移、ER和PR的阴性状态显著相关，Tsukamoto等[16]报道17号染色体多体与乳腺癌淋巴结转移相关。尽管各个学者分析结果情况存在不同差异，但都提示17号染色体多体可以在一定程度上预测乳腺癌转归。另外本研究中17号染色体多体与乳腺癌肿瘤大小呈负相关，可能与当前国内医疗技术提高、医保覆盖广，患者诊治早相关，需要扩大统计资料进一步确定。2007年ASCO/CAP推荐检测乳腺癌HER-2状态应用IHC和FISH，指南规定FISH报告为HER-2/CSP17比例来判定HER-2状态，但是由于17号染色体变异率大，且可能与乳腺癌患者不良预后因素相关，建议分别报告HER-2基因扩增情况以及CEP17的信号数目。并且在2009年有学者建议[17]：HER-2基因状态阴性、17号染色体多倍体的患者仍可适用靶向药物治疗，也提示了17号染色体多体的重要性。
综上所述，笔者认为17号染色体多体性在乳腺癌的发生发展中起着重要作用。一方面HER-2基因扩增者的17号染色体多体分布显著高于未扩增组，另一方面可以一定程度上判断乳腺癌患者预后。因此建议FISH检测结果报告应同时报告HER-2基因扩增情况及CEP17信号数目。
[参考文献]
[1] Ross JS，Slodkowska EA，Symmans WF，et al.The HER-2 receptor and breast cancer：ten years of targeted anti-HER-2 therapy and personalized medicine[J].Oncologist，2009，14（4）：320-368.
[2] Chorn N.Accurate identification of HER2-positive patients is essential for superior outcomes with trastuzumab therapy[J] .Oncol Nurs Forum，2006，33（2）：265-272.
[3] 李文婷，王莹.年轻女性乳腺癌中ER、PR、HER-2和Ki67的表达与临床病理意义[J].重庆医科大学学报，2012，37（9）：784-785.
[4] Krishnamurti U，Hammers JL，Arem FD，et al.Poor prognostic significance of unamplified chromosome 17 polysomy in invasive breast carcinoma[J].Mod Pathol，2009，22（8）：1044-1048.
[5] Fundia AF，Larripal，Slavutsky I.Genetic alterations genomic instability and cancer in celiac disease[J].Acta Gastroenterol Latinoam，2009，39：55-62.
[6] Michor F.Chromosomal instability and human cancer[J].Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci，2005，360（1455）：631-635.
[7] Berry DA，Cronin KA，Plevritis SK，et al.Effect of screening and adjuvant therapy on mortality from breast cancer[J].N Engl J Med，2005，353（17）：1785-1792.
[8] 王富文，应学翔，夏晓天，等.乳腺癌17号染色体多体对HER-2检测的影响及其临床病理意义[J].肿瘤，2010，30（1）：36-41.
[9] 吕亚莉，钟梅，刘琳，等.335例乳腺癌HER-2基因扩增及17号染色体多体的临床病理学分析[J].诊断病理学分析，2008，15（3）：169-172.
[10] 白燕峰，任国平，王波，等.双探针显色和荧光原位杂交法检测乳腺癌HER-2基因状态和17号染色体的分析[J].中华病理学杂志，2010，39（3）：161-165.
[11] 赵坡，姜学革，李晓瑛，等.FISH检测乳腺癌HER-2基因扩增及17号染色体多体状况及其临床病理学意义的分析[J].中华肿瘤防治杂志，2011，18（9）：680-683.
[12] 尹玉峰，曾瑄.乳腺癌相关染色体不稳定性的研究进展[J].中国肿瘤临床与康复，2012，17（2）：175-177.
[13] Zhu X，Lu Y，Lu H，et al.Genetic alterations and protein expression of HER2 and chromosome 17 polysomy in breast cancer[J].Hum Pathol，2011，42（10）：1499-1504.
[14] Risio M，Casorzo I，Redana S，et al.HER-2 gene-amplified breast cancers with monosomy of chromosome 17 are poorly responsive to trastuzumab-based treatment[J].Oncol Rep，2005，13（2）：305-309.
[15] 陈红，许建平，马小干，等.乳腺癌HER-2基因表达阳性者17号染色体倍体性与HER2蛋白表达及临床预后因素的相关性分析[J].重庆医学，2009，38（7）：803-804.
[16] Tsukamoto F，Miyoshi Y，Egawa C，et al.Clinicopathologic analysis of breast carcinoma with chromosomal aneusomy detected by fluorescence in situ hybridization[J].Cancer，2001，93（2）：165-170.
[17] Shah SS，Wang Y，Tull J，et al. Effect of high copy number of HER2 associated with polysomy 17 on HER2 protein expression in invasive breast carcinoma[J].Diagn Mol Pathol，2009，18（1）：30-33.
（收稿日期：2013-08-19）
[关键词] 乳腺肿瘤；HER-2基因；17号染色体；荧光原位杂交
[中图分类号] R737.9 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）19-33-03
乳腺癌原癌基因HER-2（人表皮生长因子受体2）的状态与乳腺癌患者预后及应用靶向治疗药物密切相关[1-2]。应用荧光原位杂交（FISH）技术能很好的反应HER-2基因扩增状态，但在检测的过程中常会出现17号染色体（CSP17）多体性，而17号染色体多体是否可以判定患者预后、指导术后放化疗、及其和HER-2基因状态的关系是近年学者研究的热点。本研究主要应用FISH技术检测186例浸润性乳腺癌患者的HER-2基因及17号染色体多体性，旨在探讨17号染色体多体与HER-2基因扩增及乳腺癌患者临床病理特征关系。
1 对象与方法
1.1 研究对象
2010年11月～2013年5月在我科进行FISH 检测的浸润性乳腺癌患者186例，年龄26～69岁。石蜡切片3μm，分别用于FISH检测与IHC 检测。
1.2 试剂与探针
IHC检测用基因科技 （上海） 有限公司抗体，ER 克隆号：SP1；PR 克隆号：SP2； Ki-67 克隆号：MIB-I。FISH检测使用北京金普嘉公司HER-2基因扩增试剂盒。
1.3 方法
1.3.1 IHC技术及结果判定 采用免疫组化evision法进行检测。ER、PR棕色阳性定位于细胞核内：（-）<10%表达阳性；（+） 10%～30%表达阳性；（++）：30%～50%表达阳性；（+++）>50%表达阳性。Ki67以<50%为低表达，以≥50%为高表达[3]。
1.3.2 FISH技术及结果判定 按照北京金普嘉公司HER-2基因扩增试剂盒说明书操作。FISH结果判定： （1） 红信号明显成簇成团：判定为簇状扩增；（2） 若不是 （1） 的情况，计数30个细胞计算Ratio值：Ratio<1.8为阴性；Ratio>2.2为阳性；Ratio介于1.8～2.2之间时，增加计数细胞。以绿色信号≥3判定为17号染色体多体[4]。
1.4 统计学方法
用SPSS11.5统计学分析软件分析，组间比较用x2检验，秩和检验及Spearman等级相关分析，P<0.05为差异有统计学意 义。
2 结果
2.1 17号染色体多体与HER-2基因扩增的相关性
186例浸润性乳腺癌患者标本中，17号染色体多体的比例为 43.0%（80/186），其中HER-2基因扩增组66.3% （53/80），HER-2基因未扩增组25.5%（27/106），前者显著高于后者（x2=30.929，P=0.000）。见表1。
2.2 17号染色体多体与各临床病理特征联系
不同肿瘤分级及肿瘤大小的17号染色体倍体性分布不同，差异具有统计学意义 （x2=16.221，P=0.000；x2=6.549，P=0.038）。17号染色体多体与肿瘤分级呈正相关（r=0.159 P=0.03），与肿瘤大小呈负相关 （r=-0.188，P=0.001），而与年龄、Ki67、淋巴结转移﹑ER、PR表达及ER/PR状态无关（P>0.05）。见表2。
3 讨论
人类大多数肿瘤都有基因组不稳定性的遗传学特征[5]，其中的染色体不稳定（chromosomal instability，CIN）主要是由于保持细胞基因组完整性的染色体不稳定基因突变引起[6]。乳腺癌作为女性肿瘤死亡原因的第二位[7]，其17号染色体变异是近年研究的热点，其不仅可能与HER-2基因扩增相关，还可能是评价乳腺癌预后，指导治疗的独立因素。
本研究结果中，17号染色体多体比例43%，与王富文等[8]（38%）及吕亚莉等[9] （45.9%）报道的存在不同差异，但结果基本一致，这与各个统计资料差异有关。17号染色体多体在HER-2基因扩增组的分布 （66.3%） 显著高于HER-2基因未扩增组 （25.5%）（P=0.000），同大多数学者报道一致[9-11]，提示HER-2基因扩增的患者17号染色体变异更显著，这可能是很多学者认为17号染色体多体与乳腺癌患者预后不良有关的原因，分析其机制可能是（1）：CSP17多体者HER-2基因拷贝数改变继而使HER-2蛋白增多，致患者预后不良。（2）[12]：CIN基因突变，其中Raf基因突变后导致一种肿瘤转移抑制蛋白过度消耗而与乳腺癌患者预后相关。
有研究[13]报道，HER-2基因无扩增但17号染色体多体者与既无HER-2基因扩增也无17号染色体多体者比较，其组织学分级更高、肿瘤分级更高及雌孕激素阴性阴性率更高，而这些临床病理特征往往提示该患者预后不良，也有研究者报道[14]乳腺癌中染色体倍体性与肿瘤细胞分化程度﹑存活率及复发率无关。 本研究进一步分析了17号染色体多体与临床病理特征的相关性，结果显示17号染色体多体在肿瘤分级中分布具有显著差异且两者呈正相关 （P<0.05），肿瘤分级越高，17号染色体多体分布越多，陈红等[15]报道17号染色体多体与乳腺癌淋巴结转移、ER和PR的阴性状态显著相关，Tsukamoto等[16]报道17号染色体多体与乳腺癌淋巴结转移相关。尽管各个学者分析结果情况存在不同差异，但都提示17号染色体多体可以在一定程度上预测乳腺癌转归。另外本研究中17号染色体多体与乳腺癌肿瘤大小呈负相关，可能与当前国内医疗技术提高、医保覆盖广，患者诊治早相关，需要扩大统计资料进一步确定。2007年ASCO/CAP推荐检测乳腺癌HER-2状态应用IHC和FISH，指南规定FISH报告为HER-2/CSP17比例来判定HER-2状态，但是由于17号染色体变异率大，且可能与乳腺癌患者不良预后因素相关，建议分别报告HER-2基因扩增情况以及CEP17的信号数目。并且在2009年有学者建议[17]：HER-2基因状态阴性、17号染色体多倍体的患者仍可适用靶向药物治疗，也提示了17号染色体多体的重要性。
综上所述，笔者认为17号染色体多体性在乳腺癌的发生发展中起着重要作用。一方面HER-2基因扩增者的17号染色体多体分布显著高于未扩增组，另一方面可以一定程度上判断乳腺癌患者预后。因此建议FISH检测结果报告应同时报告HER-2基因扩增情况及CEP17信号数目。
[参考文献]
[1] Ross JS，Slodkowska EA，Symmans WF，et al.The HER-2 receptor and breast cancer：ten years of targeted anti-HER-2 therapy and personalized medicine[J].Oncologist，2009，14（4）：320-368.
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[4] Krishnamurti U，Hammers JL，Arem FD，et al.Poor prognostic significance of unamplified chromosome 17 polysomy in invasive breast carcinoma[J].Mod Pathol，2009，22（8）：1044-1048.
[5] Fundia AF，Larripal，Slavutsky I.Genetic alterations genomic instability and cancer in celiac disease[J].Acta Gastroenterol Latinoam，2009，39：55-62.
[6] Michor F.Chromosomal instability and human cancer[J].Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci，2005，360（1455）：631-635.
[7] Berry DA，Cronin KA，Plevritis SK，et al.Effect of screening and adjuvant therapy on mortality from breast cancer[J].N Engl J Med，2005，353（17）：1785-1792.
[8] 王富文，应学翔，夏晓天，等.乳腺癌17号染色体多体对HER-2检测的影响及其临床病理意义[J].肿瘤，2010，30（1）：36-41.
[9] 吕亚莉，钟梅，刘琳，等.335例乳腺癌HER-2基因扩增及17号染色体多体的临床病理学分析[J].诊断病理学分析，2008，15（3）：169-172.
[10] 白燕峰，任国平，王波，等.双探针显色和荧光原位杂交法检测乳腺癌HER-2基因状态和17号染色体的分析[J].中华病理学杂志，2010，39（3）：161-165.
[11] 赵坡，姜学革，李晓瑛，等.FISH检测乳腺癌HER-2基因扩增及17号染色体多体状况及其临床病理学意义的分析[J].中华肿瘤防治杂志，2011，18（9）：680-683.
[12] 尹玉峰，曾瑄.乳腺癌相关染色体不稳定性的研究进展[J].中国肿瘤临床与康复，2012，17（2）：175-177.
[13] Zhu X，Lu Y，Lu H，et al.Genetic alterations and protein expression of HER2 and chromosome 17 polysomy in breast cancer[J].Hum Pathol，2011，42（10）：1499-1504.
[14] Risio M，Casorzo I，Redana S，et al.HER-2 gene-amplified breast cancers with monosomy of chromosome 17 are poorly responsive to trastuzumab-based treatment[J].Oncol Rep，2005，13（2）：305-309.
[15] 陈红，许建平，马小干，等.乳腺癌HER-2基因表达阳性者17号染色体倍体性与HER2蛋白表达及临床预后因素的相关性分析[J].重庆医学，2009，38（7）：803-804.
[16] Tsukamoto F，Miyoshi Y，Egawa C，et al.Clinicopathologic analysis of breast carcinoma with chromosomal aneusomy detected by fluorescence in situ hybridization[J].Cancer，2001，93（2）：165-170.
[17] Shah SS，Wang Y，Tull J，et al. Effect of high copy number of HER2 associated with polysomy 17 on HER2 protein expression in invasive breast carcinoma[J].Diagn Mol Pathol，2009，18（1）：30-33.
（收稿日期：2013-08-19）