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[摘要] 目的 观察稽留流产妇女蜕膜组织IFN-γ水平，了解稽留流产妇女的免疫学特征。 方法 检测稽留流产妇女蜕膜组织IFN-γ、IgE含量，对蜕膜组织IFN-γ与蜕膜组织总IgE进行相关性分析。ELISA法测定蜕膜组织IFN-γ和蜕膜组织总IgE。 结果 （1）实验组蜕膜组织IFN-γ水平为（2.32±0.56）pg/mL，较对照组IFN-γ水平（0.90±0.15）pg/mL明显增高，两组差异有统计学意义（P<0.01）。（2）实验组蜕膜组织总IgE水平为（4.04±1.12）KU/L，较对照组蜕膜组织总IgE水平（1.51±0.54）KU/L明显增高， 两组差异有统计学意义（P<0.01）。（3）蜕膜组织IFN-γ与蜕膜组织总IgE水平呈正相关，r=-0.698，差异有统计学意义（P<0.01）。 结论 稽留流产妇女蜕膜组织IFN-γ较正常儿童明显降低，蜕膜组织IFN-γ检测对于稽留流产妇女诊断治疗有一定参考价值。
[关键词] 稽留流产；IFN-γ；测定
[中图分类号] R714.21 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）19-52-02
蜕膜组织是子宫内膜间质受蜕膜化诱导因子刺激而增殖和再分化形成的一种特殊组织，它对于妊娠的建立和维持至关重要。子宫内膜的蜕膜和蜕膜功能的正常表达，对着床、妊娠建立与维持，以及分娩发动均起着极为重要的作用。研究蜕膜的生长、退化和调控，对于明确胚胎着床机制和生育调节都有极为重要的意义。目前关于稽留流产妇女蜕膜组织IFN-等相关因子状况的实验报道不尽相同，通常认为IFN-γ等相关因子在免疫反应的产生和调节中扮演着重要角色，IFN-γ能促进Th1细胞的分化，在自然流产妇女IFN-γ水平增加[1-3]，李彩霞等[4]的实验未得到证实，其实验显示，不明原因早期自然流产患者静脉血及脱膜组织中T细胞、T细胞亚群百分含量与正常妊娠早期妇女相同。鉴于稽留流产妇女蜕膜IFN-γ、IgE等资料欠缺以及稽留流产蜕膜IFN-γ等相关因子报道的现状，本研究对稽留流产妇女蜕膜IFN-γ、IgE进行了测定，旨在确认稽留流产妇女的免疫学特征，为稽留流产妇女临床诊断和治疗提供理论和实验依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
实验设实验观察组和对照组。选取2011年6月～2012年12月于我院收治的稽留流产患者共20例作为实验观察组，纳入条件为：初产妇，停经时间（14±6）周，B超检查确诊为宫内妊娠，但是胚胎已停止发育或胎儿已死亡；血常规凝血功能：心电图及肝肾功检查均在正常范围；无子宫畸形和其他妇科疾病，观察组年龄（29.3±8.5）岁。另选取同期相同纳入条件自愿人工流产妇女20例作为对照组，年龄（28.9±9.6）岁。实验观察组和对照组妊娠组织均行清宫术获得。
1.2 方法
1.2.1 样本处理 取上述对象子宫刮取的新鲜蜕膜组织，用生理盐水多次洗净血液，滤纸吸弃水分，剪碎成lmm大小，称重（约重100mg）以无菌器械转移至置于研磨器中，加入2mL生理盐水在低温环境下进行手工研磨，研磨均匀后移入2.5mL的EP管中，在4℃低速冷冻离心机（3000r/min）离心20min，收集上清液分装数管，统一编号放置于-70℃超低温冰箱保存，以备测定检测指标时，取出低温保存品，室温（18～25℃）下复溶，置4℃条件下备用。
1.2.2 IFN-γ和IgE检测 采用多抗体夹心ELISA方法测定，所用试剂盒为美国R&D公司公司人类免疫球蛋白E试剂盒和IFN-γ试剂盒。
1.3 统计学分析
实验组与对照组IFN-γ值和IgE值比较采用t检验，IFN-γ与IgE相关性分析采用两变量间的直线相关性分析。
2 结果
2.1 稽留流产妇女蜕膜IFN-γ水平
稽留流产妇女蜕膜IFN-γ含量测定结果见附表。实验组蜕膜IFN-γ水平为（2.32±0.56）pg/mL，较对照组蜕膜IFN-γ水平（0.90±0.15）pg/mL明显增高，两组差异有统计学意义（P<0.01）。见表1。
2.2 稽留流产妇女蜕膜IgE水平
稽留流产妇女组织总IgE含量测定结果见附表。实验组蜕膜组织总IgE水平为（4.04±1.12）KU/L，较对照组总IgE水平（1.51±0.54）KU/L明显增高，两组差异有统计学意义（P<0.01）。见表1。
2.3 稽留流产妇女蜕膜IFN-γ与IgE相关性分析
直线相关分析表明，蜕膜IFN-γ与蜕膜IgE水平呈正相关，r=0.698，差异有统计学意义（P<0.01）。
3 讨论
3.1 稽留流产妇女蜕膜IFN-γ、总IgE水平明显增高
虽然有学者报道在反复流产妇女脱膜组织T细胞亚群改变不尽相同，本实验支持稽留流产妇女蜕膜IFN-γ水平上升的结果。稽留流产妇女蜕膜IFN-γ水平增高的机制是复杂的。虽然稽留流产妇女蜕膜IFN-γ增高的机制目前尚未有确切定论，鉴于NK细胞T细胞和巨噬细胞是稽留流产妇女脱膜改变有关的三种主要细胞类型，稽留流产妇女存在明显的免疫学改变[5-7]，笔者认为稽留流产妇女在相关抗原刺激物的诱导下引起T细胞亚群的改变，以TH1功能增强为特性的相关细胞炎症因子的作用可能是稽留流产发生发展的重要始动作用环节。
3.2 IFN-γ在稽留流产妇女改变及其作用机制
普遍认为稽留流产是以机体细胞免疫过度增强为特征的炎症性疾病，其中Th1细胞优势分化是稽留流产的重要发病环节。IFN-γ对于稽留流产妇女的发展具有特别重要的意义，一方面IFN-γ可促进Th1细胞分化，抑制Th2细胞反应，另一方面，IFN-γ还具有降低机体IgE和对抗IL-4的作用。笔者认为，具有个体的过敏体质的稽留流产妇女在相关生殖抗原的作用下引起局部T细胞、B细胞和多种免疫细胞的功能改变[5-7]，IFN-γ增高是局部免疫学改变的重要结果，是胚胎生物学改变重要因素。 3.3 IFN-γ在妇女稽留流产发生发展中均有重要作用
总的认识是IFN-γ在稽留流产发生发展的不同时期通过不同的机制担负不同的作用，因此IFN-γ的测定对于稽留流产的诊断与预治有重要的意义。近年不少学者提出IFN-γ及IFN-γ受体多态性在流产妇女发生发展中具有非常重要的意义[8-10]，IFN-γ及IFN-γ受体多态性对于T细胞亚群分化的影响及其在稽留流产发生发展中的作用值得深入研究。
[参考文献]
[1] Tilburgs T，Schonkeren D，Eikmans M.Human decidual tissue contains differentiated CD8+ effector-memory T cells with unique properties[J].J Immunol，2010，185（7）：4470-4477.
[2] Mosmann TR，Sad S. The expanding universe of T-cells ubsets：Th1，Th2 and more[J].J Immunol Today，1996，17（3）：138-142.
[3] Wicherek L，Galazka K，Lazar A.RCAS1 Decidual immunoreactivity during placental abruption：immune cell presence and activity.American[J].Journal of Reproductive Immunology，2007，58（1）：46-55.
[4] 李彩霞，王晓慧，雷军强.T细胞＼T细胞亚群及NK细胞与不明原因早期自然流产的临床研究[J].中国妇幼保健，2010，25（10）：1371-1373.
[5] Paradisi R，Maldini-Casadei M，Boni P，et al.T-helper 2-cytokine levels in women with threatened abortion[J].European Journal of Obstetrics & Gynecology & Reproductive Biology，2003，111（1）：43-45.
[6] Paparistidis N，Papadopoulou C，Chioti A，et al.How valuable is measurement of peripheral blood natural killer cells at the time of abortion？[J].Am J Reprod Immunol，2008，59（4）：306-315.
[7] Calleja-Agius J，Jauniaux E，Pizzey AR，et al.Investigation of systemic inflammatory response in first trimester pregnancy failure[J].Hum Reprod，2012，27（2）：349-357.
[8] Kamali-Sarvestani E，Kiany S，Gharesi-Fard B，et al.Association study of IL-10 and IFN-γ gene polymorphisms in Iranian women with preeclampsia[J].Journal of Reproductive Immunology，2006，72（1/2）：118-126.
[9] Choi Y，Kyong KK， Joanne. Cytokine gene polymorphisms in recurrent spontaneous abortions： A Comprehensive Review[J].American Journal of Reproductive Immunology，2008，60（2）：91-110.
[10] Huang HR，Zhong YQ，Wu JF.The association between IFN-γ and IL-4 genetic polymorphisms and childhood susceptibility to bronchial asthma[J].Gene，2012，494（1）：96-101.
（收稿日期：2013-08-28）
[关键词] 稽留流产；IFN-γ；测定
[中图分类号] R714.21 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）19-52-02
蜕膜组织是子宫内膜间质受蜕膜化诱导因子刺激而增殖和再分化形成的一种特殊组织，它对于妊娠的建立和维持至关重要。子宫内膜的蜕膜和蜕膜功能的正常表达，对着床、妊娠建立与维持，以及分娩发动均起着极为重要的作用。研究蜕膜的生长、退化和调控，对于明确胚胎着床机制和生育调节都有极为重要的意义。目前关于稽留流产妇女蜕膜组织IFN-等相关因子状况的实验报道不尽相同，通常认为IFN-γ等相关因子在免疫反应的产生和调节中扮演着重要角色，IFN-γ能促进Th1细胞的分化，在自然流产妇女IFN-γ水平增加[1-3]，李彩霞等[4]的实验未得到证实，其实验显示，不明原因早期自然流产患者静脉血及脱膜组织中T细胞、T细胞亚群百分含量与正常妊娠早期妇女相同。鉴于稽留流产妇女蜕膜IFN-γ、IgE等资料欠缺以及稽留流产蜕膜IFN-γ等相关因子报道的现状，本研究对稽留流产妇女蜕膜IFN-γ、IgE进行了测定，旨在确认稽留流产妇女的免疫学特征，为稽留流产妇女临床诊断和治疗提供理论和实验依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
实验设实验观察组和对照组。选取2011年6月～2012年12月于我院收治的稽留流产患者共20例作为实验观察组，纳入条件为：初产妇，停经时间（14±6）周，B超检查确诊为宫内妊娠，但是胚胎已停止发育或胎儿已死亡；血常规凝血功能：心电图及肝肾功检查均在正常范围；无子宫畸形和其他妇科疾病，观察组年龄（29.3±8.5）岁。另选取同期相同纳入条件自愿人工流产妇女20例作为对照组，年龄（28.9±9.6）岁。实验观察组和对照组妊娠组织均行清宫术获得。
1.2 方法
1.2.1 样本处理 取上述对象子宫刮取的新鲜蜕膜组织，用生理盐水多次洗净血液，滤纸吸弃水分，剪碎成lmm大小，称重（约重100mg）以无菌器械转移至置于研磨器中，加入2mL生理盐水在低温环境下进行手工研磨，研磨均匀后移入2.5mL的EP管中，在4℃低速冷冻离心机（3000r/min）离心20min，收集上清液分装数管，统一编号放置于-70℃超低温冰箱保存，以备测定检测指标时，取出低温保存品，室温（18～25℃）下复溶，置4℃条件下备用。
1.2.2 IFN-γ和IgE检测 采用多抗体夹心ELISA方法测定，所用试剂盒为美国R&D公司公司人类免疫球蛋白E试剂盒和IFN-γ试剂盒。
1.3 统计学分析
实验组与对照组IFN-γ值和IgE值比较采用t检验，IFN-γ与IgE相关性分析采用两变量间的直线相关性分析。
2 结果
2.1 稽留流产妇女蜕膜IFN-γ水平
稽留流产妇女蜕膜IFN-γ含量测定结果见附表。实验组蜕膜IFN-γ水平为（2.32±0.56）pg/mL，较对照组蜕膜IFN-γ水平（0.90±0.15）pg/mL明显增高，两组差异有统计学意义（P<0.01）。见表1。
2.2 稽留流产妇女蜕膜IgE水平
稽留流产妇女组织总IgE含量测定结果见附表。实验组蜕膜组织总IgE水平为（4.04±1.12）KU/L，较对照组总IgE水平（1.51±0.54）KU/L明显增高，两组差异有统计学意义（P<0.01）。见表1。
2.3 稽留流产妇女蜕膜IFN-γ与IgE相关性分析
直线相关分析表明，蜕膜IFN-γ与蜕膜IgE水平呈正相关，r=0.698，差异有统计学意义（P<0.01）。
3 讨论
3.1 稽留流产妇女蜕膜IFN-γ、总IgE水平明显增高
虽然有学者报道在反复流产妇女脱膜组织T细胞亚群改变不尽相同，本实验支持稽留流产妇女蜕膜IFN-γ水平上升的结果。稽留流产妇女蜕膜IFN-γ水平增高的机制是复杂的。虽然稽留流产妇女蜕膜IFN-γ增高的机制目前尚未有确切定论，鉴于NK细胞T细胞和巨噬细胞是稽留流产妇女脱膜改变有关的三种主要细胞类型，稽留流产妇女存在明显的免疫学改变[5-7]，笔者认为稽留流产妇女在相关抗原刺激物的诱导下引起T细胞亚群的改变，以TH1功能增强为特性的相关细胞炎症因子的作用可能是稽留流产发生发展的重要始动作用环节。
3.2 IFN-γ在稽留流产妇女改变及其作用机制
普遍认为稽留流产是以机体细胞免疫过度增强为特征的炎症性疾病，其中Th1细胞优势分化是稽留流产的重要发病环节。IFN-γ对于稽留流产妇女的发展具有特别重要的意义，一方面IFN-γ可促进Th1细胞分化，抑制Th2细胞反应，另一方面，IFN-γ还具有降低机体IgE和对抗IL-4的作用。笔者认为，具有个体的过敏体质的稽留流产妇女在相关生殖抗原的作用下引起局部T细胞、B细胞和多种免疫细胞的功能改变[5-7]，IFN-γ增高是局部免疫学改变的重要结果，是胚胎生物学改变重要因素。 3.3 IFN-γ在妇女稽留流产发生发展中均有重要作用
总的认识是IFN-γ在稽留流产发生发展的不同时期通过不同的机制担负不同的作用，因此IFN-γ的测定对于稽留流产的诊断与预治有重要的意义。近年不少学者提出IFN-γ及IFN-γ受体多态性在流产妇女发生发展中具有非常重要的意义[8-10]，IFN-γ及IFN-γ受体多态性对于T细胞亚群分化的影响及其在稽留流产发生发展中的作用值得深入研究。
[参考文献]
[1] Tilburgs T，Schonkeren D，Eikmans M.Human decidual tissue contains differentiated CD8+ effector-memory T cells with unique properties[J].J Immunol，2010，185（7）：4470-4477.
[2] Mosmann TR，Sad S. The expanding universe of T-cells ubsets：Th1，Th2 and more[J].J Immunol Today，1996，17（3）：138-142.
[3] Wicherek L，Galazka K，Lazar A.RCAS1 Decidual immunoreactivity during placental abruption：immune cell presence and activity.American[J].Journal of Reproductive Immunology，2007，58（1）：46-55.
[4] 李彩霞，王晓慧，雷军强.T细胞＼T细胞亚群及NK细胞与不明原因早期自然流产的临床研究[J].中国妇幼保健，2010，25（10）：1371-1373.
[5] Paradisi R，Maldini-Casadei M，Boni P，et al.T-helper 2-cytokine levels in women with threatened abortion[J].European Journal of Obstetrics & Gynecology & Reproductive Biology，2003，111（1）：43-45.
[6] Paparistidis N，Papadopoulou C，Chioti A，et al.How valuable is measurement of peripheral blood natural killer cells at the time of abortion？[J].Am J Reprod Immunol，2008，59（4）：306-315.
[7] Calleja-Agius J，Jauniaux E，Pizzey AR，et al.Investigation of systemic inflammatory response in first trimester pregnancy failure[J].Hum Reprod，2012，27（2）：349-357.
[8] Kamali-Sarvestani E，Kiany S，Gharesi-Fard B，et al.Association study of IL-10 and IFN-γ gene polymorphisms in Iranian women with preeclampsia[J].Journal of Reproductive Immunology，2006，72（1/2）：118-126.
[9] Choi Y，Kyong KK， Joanne. Cytokine gene polymorphisms in recurrent spontaneous abortions： A Comprehensive Review[J].American Journal of Reproductive Immunology，2008，60（2）：91-110.
[10] Huang HR，Zhong YQ，Wu JF.The association between IFN-γ and IL-4 genetic polymorphisms and childhood susceptibility to bronchial asthma[J].Gene，2012，494（1）：96-101.
（收稿日期：2013-08-28）