【摘 要】
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为了获取大量的有良好抗原性的猪圆环病毒2型(PCV-2)重组Cap蛋白,用于PCV-2抗体检测试剂盒的研制,试验对PCV-2 ORF2全长基因进行扩增,构建重组表达质粒p ET-30a-Cap,转化E.co
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室; 东北林业大学野生动物资源学院;
【基金项目】
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国际科技合作与交流专项(2011DFA32210)
论文部分内容阅读
为了获取大量的有良好抗原性的猪圆环病毒2型(PCV-2)重组Cap蛋白,用于PCV-2抗体检测试剂盒的研制,试验对PCV-2 ORF2全长基因进行扩增,构建重组表达质粒p ET-30a-Cap,转化E.coli BL21(DE3),在SDS-PAGE分析基础上,结合Image J和Graphpad prism 5.0软件的分析,对重组菌E.coli BL21(p ET-30a-Cap)表达条件进行了优化,诱导产物纯化后,经SDS-PAGE分析及Western-blot鉴定其抗原性。结果表明:重组Cap蛋白的最佳表达条件是当菌体浓度(OD600值)达到1.0~1.5时,加入终浓度为0.2 mmol/L的IPTG,37℃恒温摇床175 r/min振荡培养5 h;纯化获得高纯度的重组Cap蛋白,且该蛋白具有良好的反应原性。说明表达的重组Cap蛋白具有良好的抗原性,能为检测PCV-2抗体的间接ELISA试剂盒的研制提供诊断抗原。
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