比较3种富集结肠癌HCT116细胞肿瘤干细胞(CSC)培养方案的效率。
方法含不同浓度生长因子的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)/F12无血清培养基(分为G1、G2、G3组)悬浮培养HCT116细胞14 d获得细胞球，其中G1组方案：10 ng/ml上皮生长因子(EGF)＋10 ng/ml成纤维细胞生长因子(bFGF)；G2组：20 ng/ml EGF＋10 ng/ml bFGF；G3组：20 ng/ml EGF＋20 ng/ml bFGF。流式细胞术(FCM)检测细胞球中CD133＋CD44＋、CD133＋、CD44＋比例变化及细胞周期变化；实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞球中CSC基因(CD133、CD44、CD166、CD66c) mRNA表达变化；Sphere-forming assay检测细胞球自我更新能力变化；平板克隆形成实验检测细胞体外成瘤能力变化；CCK-8检测细胞增殖能力变化。
结果FCM检测3组细胞中CD133＋细胞比例分别为0.167±0.025、0.233±0.031和0.030±0.010，差异有统计学意义(F＝58.020，P＝0.000)；3组细胞中CD133＋CD44细胞比例分别为0.033±0.006、0.097±0.031和0.023±0.006，差异有统计学意义(F＝14.233，P＝0.005)；FCM检测细胞周期结果：3组细胞G0/G1期比例分别为52.533±0.929，66.893±1.057和57.377±1.256，差异有统计学意义(F＝134.945，P＝0.000)；3组细胞S期比例分别为35.770±0.799、32.443±1.110和34.463±0.396，差异有统计学意义(F＝12.471，P＝0.007)；3组细胞G2/M期比例分别为11.697±0.527、0.533±0.117和8.163±0.872，差异有统计学意义(F＝278.685，P＝0.000)。Real-time PCR检测结果：3组CSC基因CD133、CD44、CD166、CD66c分别为G1组：2.222±0.830、26.858±3.084、22.556±2.493和14.737±2.105，G2组：6.034±0.978、66.149±2.643、64.514±5.823和54.670±2.052，G3组：2.208±0.898、23.591±4.995、23.377±1.821和6.877±0.449；各组上述基因表达比较，差异有统计学意义(F＝17.851、121.788、119.265、668.579)。Sphere-forming assay检测结果：3组细胞形成细胞球分别为175.000±22.913、412.667±14.742和133.667±12.583，3组比较，差异有统计学意义(F＝226.557，P＝0.000)。平板克隆形成实验检测结果：3组细胞形成克隆数分别为173.667±11.676、394.333±24.685和152.333±24.338，3组比较，差异有统计学意义(F＝120.754，P＝0.000)。CCK-8检测结果显示，3组细胞在增殖24、48、72 h后吸光度(A)值分别为G1组：1.147±0.058、1.555±0.083、1.827±0.111，G2组：1.460±0.107、2.243±0.106、2.637±0.105，G3组：1.062±0.053、1.530±0.104、2.120±0.225，3组细胞A值差异均有统计学意义(F＝22.217、50.795、20.360，P＝0.000)。
结论G2组方案更能有效富集结肠癌HCT116细胞的肿瘤干细胞。