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摘要[目的] 分析蓝莓幼嫩芽叶中的儿茶素类茶多酚成分含量。[方法] 应用高效液相色谱（HPLC） 技术，对南高丛蓝莓“夏普蓝”叶片儿茶素类茶多酚含量进行了分析。[结果]试验表明，蓝莓幼嫩芽叶含有5种主要儿茶素类茶多酚，分别为儿茶素（C）、表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子酸（GA），此外还含有咖啡因（CAF）。[结论]研究可为蓝莓作为一种理想的茶用资源植物提供科学依据及植物化学方面的证据。
关键词蓝莓；茶多酚；儿茶素
中图分类号S663.2文献标识码
A文章编号0517-6611（2014）28-09918-02
Analysis on the Catechins of Tea Polyphenols in Leaves of Blueberry
WANG Lianrun， LIU Jiaxun*， LIANG Mingtai et al（Institute of Horticultural Crops， Yunnan Academy of Agricultural Sciences， Kunming， Yunnan 650205）
Abstract [Objective] To analyze catechin of tea polyphenols in leaves of blueberry. [Method] The catechins of tea polyphenols in leaves of highbush blueberry “sharplbue” were analyzed with HPLC. [Result] The results showed that， 5 kinds of catechins of tea polyphenols were found in leaves. There are C， EC， ECG， EGCG， GA， in addition， it also contains CAF. [Conclusion] The study can provide scientific basis and phytochemical evidence that bluberry can be as an ideal resources plant used as tea.
Key words Blueberry； Tea polyphenol； Catechin
蓝莓（bluberry），又称为越桔或蓝浆果，为杜鹃花科（Ericaeae）越桔属（vaccinium L）植物。由于对蓝莓果实保健意义的科学论证， 尤其是色素在保护视力上的作用， 使蓝莓受到越来越广泛的重视，联合国粮农组织将其列为人类五大健康食品之一[1]。
茶多酚（TP）是茶叶中一类主要的化学成分，也是茶叶的主要活性成分，占茶叶干重的20%～35%，其主要组分为儿茶素，占其总量的80%左右。茶叶中儿茶素主要为表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素（EGC）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）等。近年来，大量研究证实TP具有消除自由基、抗氧化等生物活性，在抑菌、抗病毒、抑制肿瘤、防治心血管疾病等方面具有良好功效[2]。笔者通过对蓝莓幼嫩芽叶中的儿茶素类茶多酚成分分析，旨在为蓝莓作为一种理想的茶用植物提供科学依据及植物化学方面的证据，对进一步挖掘蓝莓树种的潜在价值具有重要意义。
1材料与方法
1.1材料
测试样品采集于云南省农业科学院园艺作物研究所蓝莓试验基地3年生南高丛蓝莓“夏普蓝”植株，采集带2～3片嫩叶的芽，样品采集后及时送至检测中心进行检测前处理。
1.2儿茶素类茶多酚含量测定
1.2.1仪器及分析条件。样品检测在中国科学院昆明植物研究所检测中心进行。分析仪器采用Agilent1100 高效液相色谱仪，色谱柱为ZORBAX SBC18 （250×4.6 mm，5 μm，Agilent公司生产），柱温为40 ℃。
1.2.2洗脱条件。用乙腈-甲酸缓冲液梯度洗脱，0→5 min为8%乙腈∶92%水（含5%甲酸）；从5～23 min 洗脫液浓度过渡到25%乙腈∶75%水（含5%甲酸）；23～25 min 洗脱液为8%乙腈∶92%水（含5%甲酸）；流速为1 ml/min，检测波长为280 nm。
1.2.3分析样品溶液的制备。样品于60 ℃烘箱干燥，粉碎，从粉碎样品中准确称取2.291 g于15 ml容量瓶中，加入甲醇10 ml，摇匀，室温浸提2 h，超声提取30 min，加入甲醇定容至15 ml，摇匀，静置，取上清液经0.45 μm 微孔滤膜过滤，4 ℃条件下保存待测。
2结果与分析
采用高效液相色谱法对南高丛蓝莓“夏普蓝”的幼嫩芽叶中儿茶素类茶多酚含量进行定量分析，结果表明（图1），除表没食子儿茶素（EGC）未能检测出外，其余5种儿茶素类茶多酚能清晰地相互分开并能准确定量，表明高效液相色谱法用于蓝莓幼嫩芽叶中儿茶素类茶多酚含量的定量分析检测可行、可靠、灵敏。
从表1可以看出，表没食子儿茶素没食子酸（EGCG）的含量最高，达1.28%；其次为表儿茶素没食子酸酯（ECG），含量为0.37%；儿茶素（C）含量较低，仅为0.11%；表儿茶素（EC）、咖啡因（CAF）和没食子酸（GA）三者的含量均非常低，表没食子儿茶素（EGC）可能由于含量太低在蓝莓幼嫩鲜芽叶中未能检测出。
3讨论
从检测结果来看，蓝莓幼嫩鲜叶中的表儿茶（EC）、没食子酸（GA）和咖啡因（CAF）3种成分含量较低，这可能与检测样品的性状有关。茶多酚受内外因素的影响变化大 [3]，而茶叶在加工制作过程中要经过高温杀青（以绿茶为例）、揉捻、烘干等工序而发生复杂的生理生化变化，从而导致儿茶素类茶多酚含量发生变化，儿茶素类茶多酚含量检测一般采用经过加工制作的成品茶叶[4-6]，故该研究中选用鲜叶进行检测可能是分析结果含量偏低的原因之一。
茶叶作为一种天然健康的饮料日益受到人们的青睐，咖啡碱是茶叶中一种含量很高的生物碱，一般含量为2%～5%，咖啡碱具有兴奋神经、祛除疲劳、增强心血管系统活动等多种保健功效，然而，高剂量摄入咖啡碱会刺激中枢神经，引起人体焦躁不安、心悸失眠、头痛等症状。因此，目前国内外市场对茶叶新的消费需求趋向于饮用不含或少含咖啡碱的茶饮料[5]。该研究结果表明，蓝莓幼嫩芽叶中咖啡碱的含量极低，远低于唐一春等低咖啡碱茶树种质资源中咖啡碱的含量研究结果[5]。对蓝莓茎叶进行化学成分提取、分离及结构鉴定结果表明，蓝莓茎叶中含有槲皮素、胡萝卜苷等大量对人体有益的成分[7]。此外，笔者通过多年的研究发现，在半促成栽培中，南高丛蓝莓具有很强的新梢萌芽力，完全可以作为茶用植物进行开发利用。因此，结合该研究对蓝莓幼嫩芽叶中的儿茶素类茶多酚成分含量进行定量分析结果，为蓝莓作物一种理想的茶用植物资源加以开发利用提供了科学依据及植物化学方面的证据，为蓝莓树种提值增效以及进一步挖掘潜在的利用价值奠定了基础。
参考文献
[1]
杨静全，和加卫，和秀云，等.云南食用小浆果的发展前景[J].云南农业科技，2003（S1）：103-107.
[2] 刘本英，王平盛.茶多酚生物学活性的研究进展[J].热带农业科技，2006，29（2）：28-33.
[3] 金莹，孙爱东.植物多酚的结构及生物学活性的研究[J].中国食物与营养，2005（9）：27-29.
[4] 郭桂义，严佩峰，文宏，等. 安吉白茶与信阳群体种信阳毛尖茶化学成分和品质的比较[J].食品科技，2010，35（6）：118-121.
[5] 唐一春，宋维希，矣兵，等.低咖啡碱茶树种质资源的鉴定及评价[J].西南农业学报，2010，23（4）：1051-1054.
[6] 张颖君，杨崇仁，曾恕芬，等.白莺山古茶的化学成分分析与栽培茶树的起源[J].云南植物研究，2010，32（1） ：77-82.
[7] 王喜军，范玉玲，闫雪莹.越桔茎叶化学成分提取、分离及结构鉴定[J].中草药，2002，33（7）：595-596.
关键词蓝莓；茶多酚；儿茶素
中图分类号S663.2文献标识码
A文章编号0517-6611（2014）28-09918-02
Analysis on the Catechins of Tea Polyphenols in Leaves of Blueberry
WANG Lianrun， LIU Jiaxun*， LIANG Mingtai et al（Institute of Horticultural Crops， Yunnan Academy of Agricultural Sciences， Kunming， Yunnan 650205）
Abstract [Objective] To analyze catechin of tea polyphenols in leaves of blueberry. [Method] The catechins of tea polyphenols in leaves of highbush blueberry “sharplbue” were analyzed with HPLC. [Result] The results showed that， 5 kinds of catechins of tea polyphenols were found in leaves. There are C， EC， ECG， EGCG， GA， in addition， it also contains CAF. [Conclusion] The study can provide scientific basis and phytochemical evidence that bluberry can be as an ideal resources plant used as tea.
Key words Blueberry； Tea polyphenol； Catechin
蓝莓（bluberry），又称为越桔或蓝浆果，为杜鹃花科（Ericaeae）越桔属（vaccinium L）植物。由于对蓝莓果实保健意义的科学论证， 尤其是色素在保护视力上的作用， 使蓝莓受到越来越广泛的重视，联合国粮农组织将其列为人类五大健康食品之一[1]。
茶多酚（TP）是茶叶中一类主要的化学成分，也是茶叶的主要活性成分，占茶叶干重的20%～35%，其主要组分为儿茶素，占其总量的80%左右。茶叶中儿茶素主要为表儿茶素（EC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素（EGC）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）等。近年来，大量研究证实TP具有消除自由基、抗氧化等生物活性，在抑菌、抗病毒、抑制肿瘤、防治心血管疾病等方面具有良好功效[2]。笔者通过对蓝莓幼嫩芽叶中的儿茶素类茶多酚成分分析，旨在为蓝莓作为一种理想的茶用植物提供科学依据及植物化学方面的证据，对进一步挖掘蓝莓树种的潜在价值具有重要意义。
1材料与方法
1.1材料
测试样品采集于云南省农业科学院园艺作物研究所蓝莓试验基地3年生南高丛蓝莓“夏普蓝”植株，采集带2～3片嫩叶的芽，样品采集后及时送至检测中心进行检测前处理。
1.2儿茶素类茶多酚含量测定
1.2.1仪器及分析条件。样品检测在中国科学院昆明植物研究所检测中心进行。分析仪器采用Agilent1100 高效液相色谱仪，色谱柱为ZORBAX SBC18 （250×4.6 mm，5 μm，Agilent公司生产），柱温为40 ℃。
1.2.2洗脱条件。用乙腈-甲酸缓冲液梯度洗脱，0→5 min为8%乙腈∶92%水（含5%甲酸）；从5～23 min 洗脫液浓度过渡到25%乙腈∶75%水（含5%甲酸）；23～25 min 洗脱液为8%乙腈∶92%水（含5%甲酸）；流速为1 ml/min，检测波长为280 nm。
1.2.3分析样品溶液的制备。样品于60 ℃烘箱干燥，粉碎，从粉碎样品中准确称取2.291 g于15 ml容量瓶中，加入甲醇10 ml，摇匀，室温浸提2 h，超声提取30 min，加入甲醇定容至15 ml，摇匀，静置，取上清液经0.45 μm 微孔滤膜过滤，4 ℃条件下保存待测。
2结果与分析
采用高效液相色谱法对南高丛蓝莓“夏普蓝”的幼嫩芽叶中儿茶素类茶多酚含量进行定量分析，结果表明（图1），除表没食子儿茶素（EGC）未能检测出外，其余5种儿茶素类茶多酚能清晰地相互分开并能准确定量，表明高效液相色谱法用于蓝莓幼嫩芽叶中儿茶素类茶多酚含量的定量分析检测可行、可靠、灵敏。
从表1可以看出，表没食子儿茶素没食子酸（EGCG）的含量最高，达1.28%；其次为表儿茶素没食子酸酯（ECG），含量为0.37%；儿茶素（C）含量较低，仅为0.11%；表儿茶素（EC）、咖啡因（CAF）和没食子酸（GA）三者的含量均非常低，表没食子儿茶素（EGC）可能由于含量太低在蓝莓幼嫩鲜芽叶中未能检测出。
3讨论
从检测结果来看，蓝莓幼嫩鲜叶中的表儿茶（EC）、没食子酸（GA）和咖啡因（CAF）3种成分含量较低，这可能与检测样品的性状有关。茶多酚受内外因素的影响变化大 [3]，而茶叶在加工制作过程中要经过高温杀青（以绿茶为例）、揉捻、烘干等工序而发生复杂的生理生化变化，从而导致儿茶素类茶多酚含量发生变化，儿茶素类茶多酚含量检测一般采用经过加工制作的成品茶叶[4-6]，故该研究中选用鲜叶进行检测可能是分析结果含量偏低的原因之一。
茶叶作为一种天然健康的饮料日益受到人们的青睐，咖啡碱是茶叶中一种含量很高的生物碱，一般含量为2%～5%，咖啡碱具有兴奋神经、祛除疲劳、增强心血管系统活动等多种保健功效，然而，高剂量摄入咖啡碱会刺激中枢神经，引起人体焦躁不安、心悸失眠、头痛等症状。因此，目前国内外市场对茶叶新的消费需求趋向于饮用不含或少含咖啡碱的茶饮料[5]。该研究结果表明，蓝莓幼嫩芽叶中咖啡碱的含量极低，远低于唐一春等低咖啡碱茶树种质资源中咖啡碱的含量研究结果[5]。对蓝莓茎叶进行化学成分提取、分离及结构鉴定结果表明，蓝莓茎叶中含有槲皮素、胡萝卜苷等大量对人体有益的成分[7]。此外，笔者通过多年的研究发现，在半促成栽培中，南高丛蓝莓具有很强的新梢萌芽力，完全可以作为茶用植物进行开发利用。因此，结合该研究对蓝莓幼嫩芽叶中的儿茶素类茶多酚成分含量进行定量分析结果，为蓝莓作物一种理想的茶用植物资源加以开发利用提供了科学依据及植物化学方面的证据，为蓝莓树种提值增效以及进一步挖掘潜在的利用价值奠定了基础。
参考文献
[1]
杨静全，和加卫，和秀云，等.云南食用小浆果的发展前景[J].云南农业科技，2003（S1）：103-107.
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[7] 王喜军，范玉玲，闫雪莹.越桔茎叶化学成分提取、分离及结构鉴定[J].中草药，2002，33（7）：595-596.