摘要：为满足畜牧生产需求，更有效地控制奶牛的后代性别，采用RNA干扰技术分别对2头成年健康繁殖性能正常的荷斯坦公牛Zfy基因mRNA进行干扰，应用SPSS 19.0统计软件进行卡方检验分析方法。结果显示，与对照组相比，干扰组公牛的后代性别比例发生明显的偏移，母犊比例达75%以上，而子代的体尺、生长发育及繁殖性能等均无变化。得出结论，干扰Zfy基因生产奶牛性控精液的方法简单、方便、易操作，在生产中具有一定的推广价值和应用前景。
　　关键词：奶牛;性别控制;试验;效果验证
　　中图分类号： S823.3 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2019）23-0195-02
　　与Y染色体相关的锌指蛋白转录因子（Y chromosome linked Zinc-finger protein transcriptional factor，Zfy），是位于Y染色體短臂上的能够编码锌指蛋白的基因。Zfy基因参与哺乳动物的单倍体生精细胞的更新分化和发育，对于减数分裂和精子生成至关重要。Zfy与精子的形成与发生相关，作为一个较强的转录激活因子，引导靶基因穿过核膜，定位于精子细胞核内，可能对精子变态过程中的某些基因具有转录激活作用[1-2]。1986年，Vergnaud等通过对Y染色体上有不同缺失的患者的DNA文库进行分子杂交，首次克隆获得了Zfy基因[3]。而睾丸决定因子最佳候选基因Sry被发现前，Zfy基因曾被认为是睾丸决定因子的候选基因[4]，在雄性睾丸生长发育过程中发挥重要作用[5-6]。彭强等首次用RNAi的方法通过构建Zfy基因siRNA重组表达载体进行小鼠体内RNAi的研究，从而研究编码Zfy基因在精子的生成过程中的作用，其后代出现雄性小鼠比例下降现象[7]。马军德通过逆转录病毒RNAi载体对小鼠进行性别控制产生了显著效果，在小鼠后代性别鉴定中绝大部分窝组的母鼠率都达到了70%以上[8]。本研究就Zfy基因干扰技术在奶牛性别控制中的应用进行简单的介绍。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　1.1.1 主要试剂与设备 酵母、蛋白胨、氯化钠、氨苄青霉素、无内毒素质粒提取试剂盒（北京天根生化有限公司）、无水乙醇、异丙醇、双抗（上海英骏生物技术有限公司）。
　　冷冻离心机、水浴锅、振荡器、摇床、恒温干燥箱。
　　1.1.2 试验动物 试验公牛来自新疆天山畜牧生物工程股份有限公司种公牛站，随机选择系谱资料完整的健康荷斯坦种公牛2头，受配荷斯坦母牛均健康、成年，繁殖性能良好。
　　1.2 方法
　　1.2.1 重组表达质粒制备 将保存的菌种从-80 ℃超低温冰箱中取出，室温解冻后，超净台中将200 μL菌液接种至200 mL含氨苄青霉素（100 μg/mL）的Luria-Bertani培养基，摇床内37 ℃、8 000 r/min过夜培养。12～16 h后将处于对数期的菌液取出，按照无内毒素质粒大提试剂盒说明书提取质粒，测定浓度后-20 ℃保存备用。
　　1.2.2 Zfy基因mRNA表达水平检测 通过实时定量PCR（RT-PCR）检测重组干扰质粒pLL3.7-A、pLL3.7-B对奶牛生精细胞的Zfy基因mRNA表达水平的干扰效果，结果显示，与对照组（未做任何干扰处理）相比，奶牛生精细胞转染pLL3.7-A后Zfy基因mRNA表达水平显著降低了50%（P