观察长链非编码RNA LINC00460(lncRNA LINC00460)对结直肠癌细胞株(SW620、HT-29)细胞增殖和血管形成能力的影响。
方法利用RT-qPCR方法检测4种结直肠癌细株(SW620、HCT116、DLD1、HT-29)和正常肠上皮细胞(FHC)中LINC00460的表达;选择相对表达最高的SW620细胞,及HT-29细胞,通过慢病毒载体介导构建敲低组LINC00460稳转细胞株(sh#1、sh#2),同时设立对照组(shCtrl);RT-qPCR方法检测各组结直肠癌细胞中LINC00460 mRNA的表达量;蛋白质印迹法(Western blot)实验检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达量;CCK8实验检测细胞的增殖能力;血管形成实验检测LINC00460对结直肠癌细胞SW620和HT-29血管形成能力的影响。计数资料以率(%)表示,组间比较采用χ2检验,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用独立样本t检验。
结果与正常肠上皮细胞FHC比较,LINC00460在结直肠癌细胞株中表达增高(FHC:1.0±0.0,SW620:4.79±0.05,HCT116:3.45±0.1,DLD1:3.14±0.08,HT-29:2.30±0.0,t=-2.850,P值均<0.01),差异有统计学意义,以SW620细胞株中的表达最高。与对照组比较,敲低LINC00460后,结直肠癌细胞SW620、HT-29中LINC00460 mRNA表达量降低,p-Akt的蛋白表达量降低,增殖能力减弱(SW620 sh#1:0.69±0.07比1.69±0.09,sh#2:1.0±0.16比1.69±0.09;t=12.560,P值均<0.05),差异有统计学意义,血管形成能力减弱(HT-29 sh#1:40.0±7.0比81.0±1.0,sh#2:35.33±4.51比81.0±1.0;t=1.950,P值均<0.05),差异有统计学意义。
结论敲低LINC00460后,结直肠癌细胞SW620和HT-29的p-Akt表达量降低,进而使结直肠癌细胞增殖及血管形成能力减弱。