【摘 要】
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目的:构建肺腺癌细胞S100A6基因siRNA慢病毒载体并鉴定。方法:慢病毒载体(pL enR-GPH)构建靶向S100A6基因的RNA干扰重组体,用以建立S100A6基因稳定沉默的肺腺癌A549细胞株。
【机 构】
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陕西省肿瘤医院介入科,第四军医大学唐都医院呼吸与危重症医学科
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目的:构建肺腺癌细胞S100A6基因siRNA慢病毒载体并鉴定。方法:慢病毒载体(pL enR-GPH)构建靶向S100A6基因的RNA干扰重组体,用以建立S100A6基因稳定沉默的肺腺癌A549细胞株。结果:PCR鉴定结果显示3个扩增的阳性片段均已插入pL enR-GPH载体,测序结果证实三个重组慢病毒载体SH1、SH2、SH3的插入序列完全正确,重组慢病毒载体转染到293T细胞中包装成病毒颗粒,将其感染肺癌A549细胞后,RT-PCR和Western blot检测结果均证实三组重组体感染的细胞内S100A6 mRNA和蛋白的表达受到不同程度的抑制,沉默效率分别为98.29%、84.05%及78.24%。结论:成功构建了S100A6基因RNAi慢病毒重组载体,并建立了其稳定表达的肺腺癌A549细胞株,为探讨S100A6基因对肺腺癌生物学行为的影响提供了可靠的细胞模型。
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