【摘 要】
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研究旨在克隆徐淮山羊过氧化物酶体激活增殖受体(PPAR)基因的cDNA,并通过EGFP融合蛋白对该基因产物亚细胞水平定位.采用RT-PCR方法克隆徐淮山羊脂肪组织 PPAR 基因 cDNA,并构
【机 构】
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扬州大学动物科学与技术学院,苏州市吴中区东山动物防疫站
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研究旨在克隆徐淮山羊过氧化物酶体激活增殖受体(PPAR)基因的cDNA,并通过EGFP融合蛋白对该基因产物亚细胞水平定位.采用RT-PCR方法克隆徐淮山羊脂肪组织 PPAR 基因 cDNA,并构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-PPAR,聚乙烯亚胺(PEI)介导基因转染 NIH-3T3细胞,48h后荧光倒置显微镜下观察基因表达产物的分布,RT-PCR检测mRNA在体外水平的表达.结果表明:首次成功克隆出徐淮山羊PPAR基因的全序列cDNA,大小为1 428 bp,GenBank登录号为GUO82382;构建了融合表达载体pEGFP-C1-PPAR;RT-PCR检测mRNA表达明显;EGFP-PPAR融合蛋白定位在NIT-3T3细胞质中.体外克隆的徐淮山羊PPAR基因cDNA,在单细胞水平上可表达于细胞质中,结果为进一步研究PPAR的生物学功能奠定基础.
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