【摘 要】
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目的:筛选与突变SOD1编码蛋白相互作用的蛋白.方法:应用Clontech酵母双杂交系统3,对人胎脑cD-NA文库进行筛选.把构建成功的质粒pGBKT7-mSOD1cDNA转染酵母菌AH109,再与含有已
【机 构】
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第三军医大学西南医院神经内科,400038;第三军医大学西南医院烧伤研究所,400038
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目的:筛选与突变SOD1编码蛋白相互作用的蛋白.方法:应用Clontech酵母双杂交系统3,对人胎脑cD-NA文库进行筛选.把构建成功的质粒pGBKT7-mSOD1cDNA转染酵母菌AH109,再与含有已克隆到pACT2载体上的人胎脑cDNA文库的酵母菌Y187杂交融合.突变的SOD1cDNA与相应的人胎脑cDNA片段编码的蛋白发生相互作用后,可激活基因的表达,筛选出阳性克隆,对阳性克隆的质粒进行测序分析.在GenBank中作匹配及生物信息学分析.结果:共筛选出15个阳性克隆,其中包括9个为已知蛋白,6个为未知蛋白.其中包括PTPN2(protein tyrosinephosphatase,non-receptor type 2).结论:突变SOD1可能通过这些相互作用的蛋白进行相互调控,改变了正常SOD1酶的信号传导通路,从而使机体患病.
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