Nrf2/HO-1信号通路在右美托咪定减轻小胶质细胞氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用

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目的

评价核因子-E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路在右美托咪定减轻小胶质细胞氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用。

方法

BV-2小胶质细胞加入含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基,以1.5×104个/ml的密度接种于96孔培养板(200 μl/孔)或以2×105个/ml密度接种于6孔培养板(每孔2 ml),置于37 ℃、含5%CO2-21%O2-74 %N2的正常培养箱中培养。采用随机数字表法分为5组(n=30):正常对照组(C组)、右美托咪定组(D组)、氧糖剥夺/复氧复糖组(OGD/R组)、氧糖剥夺/复氧复糖+右美托咪定组(OGD/R+D组)和氧糖剥夺/复氧复糖+右美托咪定+ML385组(OGD/R+D+ML组)。C组在正常培养箱中继续培养26 h;D组加入终浓度为10 μmol/L的右美托咪定孵育2 h,随后在正常培养箱中培养26 h;OGD/R组、OGD/R+D组、OGD/R+D+ML组更换为无糖DMEM培养基,置于37 ℃、含5%CO2-1%O2-94 %N2的培养箱中培养2 h,然后换为含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基,在正常培养箱中培养24 h;OGD/R+D组和OGD/R+D+ML组于氧糖剥夺前2 h时加入终浓度为10 μmol/L的右美托咪定,OGD/R+D+ML组于加入右美托咪定前30 min时,加入终浓度为4 μmol/L的Nrf2抑制剂ML385。采用MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA检测上清液TNF-α、IL-6和IL-10的浓度,Western blot法检测细胞核Nrf-2、细胞Nrf-2和HO-1表达,RT-PCR法检测细胞HO-1 mRNA表达。

结果

与C组比较,OGD/R组和OGD/R+D组细胞活力降低,细胞凋亡率和上清液TNF-α、IL-6、IL-10浓度升高,细胞核Nrf2、细胞Nrf-2、HO-1及其mRNA表达上调(P<0.05),D组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05);与OGD/R组比较,OGD/R+D组细胞活力和上清液IL-10浓度升高,细胞凋亡率和上清液TNF-α、IL-6浓度降低,细胞核Nrf2、细胞Nrf2、HO-1及其mRNA表达上调(P<0.05),OGD/R+D+ML组上述差异无统计学意义(P>0.05);与OGD/R+D组比较,OGD/R+D+ML组细胞活力和上清液IL-10浓度降低,细胞凋亡率和上清液TNF-α、IL-6浓度升高,细胞核Nrf-2、细胞Nrf2、HO-1及其mRNA表达下调(P<0.05)。

结论

右美托咪定减轻小胶质细胞氧糖剥夺-复氧复糖损伤的机制与促进Nrf2/HO-1信号通路激活,抑制炎症反应有关。

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