【摘 要】
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酵母展示技术被广泛应用于抗体药物候选分子的发现与优化中,但传统酵母展示技术只能将抗体展示于表面,无法同时将抗体分泌至培养基的上清液进行亲和力测定.为克服此难点,将含Knob突变的抗体可结晶片断(Fc)展示于酵母表面作为“诱饵”,通过“Knob into Hole”的方式结合含Hole突变的免疫球蛋白(IgG)半分子,达到展示抗体的作用;同时,含Hole突变的IgG半分子自身可形成同源二聚体,形成IgG完整分子分泌至培养基中,实现酵母抗体展示与分泌的双重功能.结果发现:使用含Knob突变的重链恒定区3作为“
【机 构】
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信达生物制药(苏州)有限公司 新药研究部,江苏 苏州215123
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酵母展示技术被广泛应用于抗体药物候选分子的发现与优化中,但传统酵母展示技术只能将抗体展示于表面,无法同时将抗体分泌至培养基的上清液进行亲和力测定.为克服此难点,将含Knob突变的抗体可结晶片断(Fc)展示于酵母表面作为“诱饵”,通过“Knob into Hole”的方式结合含Hole突变的免疫球蛋白(IgG)半分子,达到展示抗体的作用;同时,含Hole突变的IgG半分子自身可形成同源二聚体,形成IgG完整分子分泌至培养基中,实现酵母抗体展示与分泌的双重功能.结果发现:使用含Knob突变的重链恒定区3作为“诱饵”,展示抗体的效果最佳;双功能酵母展示与分泌系统经模拟文库验证,可高效筛选出占比极低的含高亲和力抗体序列的菌株;筛选出的菌株可将抗体同时分泌至培养基上清,直接用于亲和力测定.本研究结果充分说明,双功能酵母展示与分泌系统搭建成功并可用于抗体的亲和力成熟中,从而显著提高工作效率、缩短抗体亲和力成熟的周期.
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