【摘 要】
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目的建立骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外分离培养体系,探讨BMSCs诱导条件下骨向分化能力和骨形成蛋白-2(BMP-2)、骨钙素(BGP)mRNA表达量及ALP活性的变化对成骨细胞增殖分化的影
【机 构】
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西安交通大学口腔医院修复科,西安交通大学口腔医院中心实验室,西安医学院口腔系
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目的建立骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外分离培养体系,探讨BMSCs诱导条件下骨向分化能力和骨形成蛋白-2(BMP-2)、骨钙素(BGP)mRNA表达量及ALP活性的变化对成骨细胞增殖分化的影响。方法采用密度梯度离心法和贴壁培养法分离大鼠BMSCs,观察细胞形态学特征;应用成骨诱导体系诱导BMSCs向成骨细胞进行分化;通过细胞形态学观察、组织化学染色鉴定,酶联免疫分析仪和RT-PCR分别定量检测7 d和14 d ALP活性及BMP-2,BGP mRNA表达。结果用密度梯度离心法结合贴壁培养法能获得高纯度的BMSCs;经骨向诱导7 d和14 d后,ALP和矿化结节染色阳性;骨向诱导组:14 d ALP活性82±1.0 U/L,mRNA表达BMP-2为6.04±0.02,BGP为3.21±0.02,分别较7 d(33±2.0 U/L,1.40±0.01,1.1±0.01)显著增高(P<0.01)。未诱导组:ALP活性低(12±1.0 U/L),BMP-2,BGP mRNA未表达,无矿化结节形成。结果显示:随培养时间延长,BMP-2增高的同时ALP活性及BGP表达量也明显增高,细胞形态发生改变并向成骨方向分化,表明与形成成骨细胞有关。结论将BMSCs成功诱导分化为成骨细胞,并建立了体外分离培养体系。提示BMP-2,BGP mRNA表达量的增加及ALP活性增高,与细胞骨向分化具有较高的相关性。
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