【摘 要】
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目的 :应用分子生物学方法克隆、表达λ轻链基因 ,探索有效制备高纯度轻链抗原技术。方法 :应用已有pComb3抗 HBsFab表达载体 ,用限制性双酶切去除Fab中的H链基因 ,合成互补
【机 构】
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上海长征医院解放军临床免疫中心,上海长征医院呼吸科,广州南方医院肿瘤科
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目的 :应用分子生物学方法克隆、表达λ轻链基因 ,探索有效制备高纯度轻链抗原技术。方法 :应用已有pComb3抗 HBsFab表达载体 ,用限制性双酶切去除Fab中的H链基因 ,合成互补于两酶点粘端的短核苷酸链 ,并加以多聚组氨酸编码基因 ,通过复性、连接酶连接构建λ轻链表达载体。结果 :重构建载体的单酶切、电泳表明分子的大小为 4 4kb ,已切除H链基因 ;阳性株经IPTG诱导表达上清的免疫转印结果显示为抗轻链血清反应带 ;电泳位置与轻链的分子量吻合 ,成单一区带 ;直接ELISA结果表明 ,正确连接的克隆表达上清与抗Polyhis血清发生反应。结论 :用生物工程技术克隆表达λ轻链具有简便、实用的特点 ,更易获得高纯度产品 ,是可以替代常规轻链抗原提纯的理想方法。
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