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摘要：目的：探讨乙型肝炎病毒核心抗原检测方法及临床应用。方法：收集34例门诊及住院病例。结果34例血清标本HBsAg阳性21例（61.76%），HBsAg阴性13例（38.24%）。结论：为了有效预防乙型肝炎的传播，有必要对HBcAg进行检测，对了解病毒感染过程及病毒复制具有重要意义。
关键词：乙型肝炎；HBcAg；检测
【中图分类号】R512.6+2 【文献标识码】A 【文章编号】1672-8602（2015）01-0131-01
0 引言
乙型病毒性肝炎是由HBV感染机体所引发的疾病。急、慢性乙型肝炎患者和乙肝病毒携带者是传染源。传染途径主要有血液传播、母婴传播、体液传播。潜伏期为28～180 d。
1 资料与方法
1.1 标本收集
标本来源于本院34门诊及住院患者。采集新鲜无抗凝或肝素钠抗凝动脉血或静脉血2～3ml，离心（1500～3000r/min）分离血清。
1.2 试剂
包被板96孔/块，直接使用，室温平衡后，按所需人份取板条量；浓缩洗涤液20ml/瓶，用前以新鲜蒸馏水或去离子水稀释25倍后备用，若有结晶，应置室温溶解后再稀释备用；阳性对照血清、阴性对照血清各0.5ml/瓶，酶结合物6ml/瓶，底物A液、底物8液、终止液各6ml/瓶，均直接使用，用前必须恢复至室温并完全摇匀，用后保存于2～8℃。
1.3 仪器
LD5-108型离心机；2510变频振荡器；恒温水浴箱；EGATE-2310洗板机；MK3酶标仪；BEPⅢ全自动酶联免疫分析仪。
1.4 检验方法
ELISA法检测抗-HBc。设空白对照1孔，仅加lOOul洗涤液；设阴、阳性对照各2孔，质控l孔，分别加入50μl阴、阳性对照物、质控血清。样品孔各加入50μl血清[1]。
1.5 結果判断
临界值（Cut-off）=阴性对照OD值×0.5。
采用S/C0值法判定结果，当S/C0值≤l为阳性，S/C0值>1为阴性（S为样品OD值，C0为Cut-off值）。
2 结果
34例血清标本HBsAg阳性21例（61.76%），HBsAg阴性13例（38.24%）。
①HBsAg与抗-HBs：感染HBV后最早1～2周HBsAg可阳性，是HBV存在的间接指标；抗-HBs出现于HBsAg转阴后，是一种保护性抗体。
②HBcAg与抗-HBc：HBcAg主要存在于受感染的肝细胞核内；血清抗-HBc可分两种：IgM型和IgG型，前者出现较早，是近期感染的标志；后者出现较迟，可存在多年。低滴度抗-HBc是过去感染的标志，高滴度时提示HBV有活动性复制。
③HBeAg与抗-HBe：HBeAg一般仅见于HBsAG阳性血清，与DNAP和HBV-DNA密切相关，是HBV活动性复制和有传染性的标志。前C区基因发生突变时，HBeAg可为阴性而HBV仍在活动复制。
③血清HBV-DNA测定：是HBV复制和传染的直接标志。
3 讨论
急性乙型肝炎与慢性乙肝肝炎的鉴别最主要是肝活检病理组织检查，但临床上往往较难做到，不过有些现象可以提示为急性乙肝，如患者入院时症状较重，肝功能异常也较明显，但HBV-DNA呈低载量或阴性，或者经治疗后HBeAG甚至HBsAG很快转阴者，多为急性乙肝。血清HBV阳性者不能献血，严格筛查血液制品，防止经输血及血制品传播。加强宣传教育，严格消毒医疗器械，杜绝共用未经消毒的刀具及注射器，防止多个性伴侣、同性恋等体液传播。对无免疫人群尤其婴幼儿等易感人群普遍进行乙肝疫苗接种，每次注射l0～20μg，按0、1、6个月方案接种3次，保护性抗体产生率达85%～95%。对于意外暴露的高危人群，如被HBV污染的针头误刺伤等可立即注射乙肝疫免球蛋白100～200 IU。对HBsAG及HBeAG阳性母亲的新生儿，出生24 h内注射乙肝免疫球蛋白，随后接种乙肝疫苗[2]。
HBsAg检测采用竞争抑制法。用纯化的基因工程重组乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）包被微孔反应板，血清标本中抗-HBc与酶标记的抗HBc共同竞争包被的HBcAg，通过温育、洗涤分离未与HBcAg形成免疫复合物的酶标记抗-HBc，以四甲基联苯胺（TMB）为底物显色，判断阴阳性。该项目运用酶免疫竞争抑制法，在原理上存在缺陷，故实验中会引起检测的灵敏度降低。
IgM型核心抗体为HBV感染早期产生的抗体，在HBeAG出现l～2周后开始升高，阳性提示乙型肝炎急性期，通常持续3～6个月，在恢复后期减弱或消失。
IgG型核心抗体继IgM抗体之后出现，见于急性后期、慢性期、恢复期或既往感染，可持续数十年乃至终身。在急性肝炎恢复过程中，在表面抗体出现之前的数周或数月，HBsAG消退和Anti-HBs升高，二者均在方法学检出水平以下，仅有核心抗体阳性时，称为隐性HBV感染窗口期，提示疾病向恢复期演变。临床意义可与e抗原阳性意义相叠加。
HBcAb检测时需注意以下事项。
试剂盒应在2～8℃保存，使用前试剂各组分应平衡至室温再开封启用；开启后应尽快用完，未用完的微孔板及时以自封袋封存。严格按照说明书操作，不同批号试剂组分请勿混用。使用前试剂应混匀。洗涤时各孔需注满，防止孔口内有游离酶未能洗净。试剂盒成分视为有传染性物质，需按传染病实验室检查规程操作。本实验过程不能有污染，否则会影响实验结果判断。
综上，HBcAb由HBcAg诱导产生，属非中和抗体，为HBV现正感染或既往感染的标志，用于病期判断和疾病流行病学研究。为了有效预防乙型肝炎的传播，有必要对HBcAg进行检测，对了解病毒感染过程及病毒复制具有重要意义[3]。
参考文献
[1] 王彧 . 酶联免疫法检测乙型肝炎病毒PreS1抗原及抗体在乙型肝炎诊断中的应用 [J ].现代医药卫生 ，2014，13： 2002-2003.
[2] 莫兰祥 . 450例已婚育龄人口乙型肝炎病毒感染血清学检测调查分析 [J ].现代养生B ，2014，01： 121-121.
[3] 王颖 .乙型肝炎病毒前对S2抗原、核心抗体IgM及其五项指标联合检测的意义 [J ].医药与保健 ，2014，08： 139-139.
关键词：乙型肝炎；HBcAg；检测
【中图分类号】R512.6+2 【文献标识码】A 【文章编号】1672-8602（2015）01-0131-01
0 引言
乙型病毒性肝炎是由HBV感染机体所引发的疾病。急、慢性乙型肝炎患者和乙肝病毒携带者是传染源。传染途径主要有血液传播、母婴传播、体液传播。潜伏期为28～180 d。
1 资料与方法
1.1 标本收集
标本来源于本院34门诊及住院患者。采集新鲜无抗凝或肝素钠抗凝动脉血或静脉血2～3ml，离心（1500～3000r/min）分离血清。
1.2 试剂
包被板96孔/块，直接使用，室温平衡后，按所需人份取板条量；浓缩洗涤液20ml/瓶，用前以新鲜蒸馏水或去离子水稀释25倍后备用，若有结晶，应置室温溶解后再稀释备用；阳性对照血清、阴性对照血清各0.5ml/瓶，酶结合物6ml/瓶，底物A液、底物8液、终止液各6ml/瓶，均直接使用，用前必须恢复至室温并完全摇匀，用后保存于2～8℃。
1.3 仪器
LD5-108型离心机；2510变频振荡器；恒温水浴箱；EGATE-2310洗板机；MK3酶标仪；BEPⅢ全自动酶联免疫分析仪。
1.4 检验方法
ELISA法检测抗-HBc。设空白对照1孔，仅加lOOul洗涤液；设阴、阳性对照各2孔，质控l孔，分别加入50μl阴、阳性对照物、质控血清。样品孔各加入50μl血清[1]。
1.5 結果判断
临界值（Cut-off）=阴性对照OD值×0.5。
采用S/C0值法判定结果，当S/C0值≤l为阳性，S/C0值>1为阴性（S为样品OD值，C0为Cut-off值）。
2 结果
34例血清标本HBsAg阳性21例（61.76%），HBsAg阴性13例（38.24%）。
①HBsAg与抗-HBs：感染HBV后最早1～2周HBsAg可阳性，是HBV存在的间接指标；抗-HBs出现于HBsAg转阴后，是一种保护性抗体。
②HBcAg与抗-HBc：HBcAg主要存在于受感染的肝细胞核内；血清抗-HBc可分两种：IgM型和IgG型，前者出现较早，是近期感染的标志；后者出现较迟，可存在多年。低滴度抗-HBc是过去感染的标志，高滴度时提示HBV有活动性复制。
③HBeAg与抗-HBe：HBeAg一般仅见于HBsAG阳性血清，与DNAP和HBV-DNA密切相关，是HBV活动性复制和有传染性的标志。前C区基因发生突变时，HBeAg可为阴性而HBV仍在活动复制。
③血清HBV-DNA测定：是HBV复制和传染的直接标志。
3 讨论
急性乙型肝炎与慢性乙肝肝炎的鉴别最主要是肝活检病理组织检查，但临床上往往较难做到，不过有些现象可以提示为急性乙肝，如患者入院时症状较重，肝功能异常也较明显，但HBV-DNA呈低载量或阴性，或者经治疗后HBeAG甚至HBsAG很快转阴者，多为急性乙肝。血清HBV阳性者不能献血，严格筛查血液制品，防止经输血及血制品传播。加强宣传教育，严格消毒医疗器械，杜绝共用未经消毒的刀具及注射器，防止多个性伴侣、同性恋等体液传播。对无免疫人群尤其婴幼儿等易感人群普遍进行乙肝疫苗接种，每次注射l0～20μg，按0、1、6个月方案接种3次，保护性抗体产生率达85%～95%。对于意外暴露的高危人群，如被HBV污染的针头误刺伤等可立即注射乙肝疫免球蛋白100～200 IU。对HBsAG及HBeAG阳性母亲的新生儿，出生24 h内注射乙肝免疫球蛋白，随后接种乙肝疫苗[2]。
HBsAg检测采用竞争抑制法。用纯化的基因工程重组乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）包被微孔反应板，血清标本中抗-HBc与酶标记的抗HBc共同竞争包被的HBcAg，通过温育、洗涤分离未与HBcAg形成免疫复合物的酶标记抗-HBc，以四甲基联苯胺（TMB）为底物显色，判断阴阳性。该项目运用酶免疫竞争抑制法，在原理上存在缺陷，故实验中会引起检测的灵敏度降低。
IgM型核心抗体为HBV感染早期产生的抗体，在HBeAG出现l～2周后开始升高，阳性提示乙型肝炎急性期，通常持续3～6个月，在恢复后期减弱或消失。
IgG型核心抗体继IgM抗体之后出现，见于急性后期、慢性期、恢复期或既往感染，可持续数十年乃至终身。在急性肝炎恢复过程中，在表面抗体出现之前的数周或数月，HBsAG消退和Anti-HBs升高，二者均在方法学检出水平以下，仅有核心抗体阳性时，称为隐性HBV感染窗口期，提示疾病向恢复期演变。临床意义可与e抗原阳性意义相叠加。
HBcAb检测时需注意以下事项。
试剂盒应在2～8℃保存，使用前试剂各组分应平衡至室温再开封启用；开启后应尽快用完，未用完的微孔板及时以自封袋封存。严格按照说明书操作，不同批号试剂组分请勿混用。使用前试剂应混匀。洗涤时各孔需注满，防止孔口内有游离酶未能洗净。试剂盒成分视为有传染性物质，需按传染病实验室检查规程操作。本实验过程不能有污染，否则会影响实验结果判断。
综上，HBcAb由HBcAg诱导产生，属非中和抗体，为HBV现正感染或既往感染的标志，用于病期判断和疾病流行病学研究。为了有效预防乙型肝炎的传播，有必要对HBcAg进行检测，对了解病毒感染过程及病毒复制具有重要意义[3]。
参考文献
[1] 王彧 . 酶联免疫法检测乙型肝炎病毒PreS1抗原及抗体在乙型肝炎诊断中的应用 [J ].现代医药卫生 ，2014，13： 2002-2003.
[2] 莫兰祥 . 450例已婚育龄人口乙型肝炎病毒感染血清学检测调查分析 [J ].现代养生B ，2014，01： 121-121.
[3] 王颖 .乙型肝炎病毒前对S2抗原、核心抗体IgM及其五项指标联合检测的意义 [J ].医药与保健 ，2014，08： 139-139.