论文部分内容阅读
摘 要：目的 建立气相色谱（GC）测定雷替曲塞中甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺3种有机残留量的测定方法。方法 采用直接进样毛细管气相色谱法，色谱柱为：DB-5色谱柱（30m×530 m×1.0 m） 载气为氮气，FID检测器，DMSO为溶剂。结果：此色谱条件下被测物均能得到很好的分离，峰面积与质量浓度呈良好的线性关系，回收率良好。结论：方法简便、灵敏，结果准确、可靠，适用于雷替曲塞中有机残留量的检测。
关键词：雷替曲塞 有机残留量 毛细管气相色谱法
雷替曲塞是一种胸腺合成酶抑制剂，属于一种喹唑啉叶酸盐类似物。在体内，雷替曲塞被细胞主动摄取后很快被叶酸基聚合谷氨酸合成酶代谢为一系列聚谷氨酸，这些代谢物比雷替曲塞具有更强抑制胸腺合成酶作用，从而抑制细胞DNA的合成，且能潴留在细胞内，长时间发挥抑制作用。在对结直肠癌的治疗中，疗效与氟尿嘧啶相似，但用雷替曲塞的副反应发生率低，方法简便，患者易于接受。由于在原药合成过程中使用了有机溶剂甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺，在成品中可能会有一定量的残留。按中国药典2010年版（附录Ⅷ）规定，该3种有机溶剂均有残留限量。对于原药中3种有机残留溶剂的色谱分析及残留量的测定尚未见文献报道。笔者参考了有关文献采用直接进样毛细管气相色谱法，测定了雷替曲塞原料药中甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺的残留量。方法简便、灵敏，结果准确可靠。
一、仪器与试药
1.仪器 Agilent 7890A
2.试药 雷替曲塞原料药3批
二、方法与结果
1.色谱条件 HP-5（30m×530μm×1.0μm）毛细管柱； 进样口温度为200℃，检测器温度为240℃。程序升温；初始温度35℃，维持5分钟，以每分钟25℃升温至220℃，维持2分钟； 分流比：10：1 ； 以DMSO为溶剂，直接进样1μl。
2.供试品溶液与对照品溶液的制备
取雷替曲塞样品0.1g，精密称定，用DMSO1.0ml溶解，作为供试品溶液。
精密称取甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺各适量，加二甲基亚砜制成每1ml中分别约含甲醇300μg、二氯甲烷60μg、N，N-二甲基甲酰胺88μg的混合溶液，作为对照品溶液。
3.系统适用性溶液
取DMSO空白溶剂1μl进行测定，结果表明溶剂无干扰。取对照品溶液1μl进行测定，记录色谱图，甲醇tR≈4.6min，二氯甲烷tR≈6.3min，N，N-二甲基甲酰胺tR≈8.4min。结果表明，各被测溶剂之间分离良好。
4.线性范围及标准曲线
取甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺适量，精密称定，用DMSO稀释制成一系列溶液，照上述色谱条件分别进行测定，以被测物峰面积为纵坐标，以被测物的质量浓度为横坐标进行线性回归。上述3种被测物的线性范围（μg/ml）依次是：30.1～361.2， 6.21～74.5， 8.82～105.8。回归方程及相关系数依次是：
Y1 = 0.6037X1 - 1.9640，r1=0.9994；
Y2 =0.4770X2 - 0.7893， r2=0.9995；
Y3= 0.6289X3 - 0.0054， r3=0.9999。
5.精密度实验
在上述色谱条件下，取对照品溶液（每1ml中含甲醇300μg，二氯甲烷60μg，N，N-二甲基甲酰胺88μg的混合溶液），连续进样6次，计算对照品溶液中被测溶剂的RSD依次为2.34% ，2.25%，2.53%。
6.最低检测限
取对照品溶液用DMSO逐步稀释，依据S/N≥3，确定甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺的最低检测限依次是2.0，1.2，1.5。
7.回收率实验
取甲醇约0.30g，二氯甲烷约0.06g，N，N-二甲基甲酰胺约0.088g，精密称定，置已加少许DMSO的10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀。移取储备液 1.0ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得每1ml中含甲醇约3000μg，二氯甲烷约600μg，N，N-二甲基甲酰胺约880μg的混合溶液。
溶液1： 精密移取混合溶液0.8ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得对照品溶液的80%溶液。
溶液2： 精密移取混合溶液1.0ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得对照品溶液的100%溶液。
溶液3： 精密移取混合溶液1.2ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得对照品溶液的120%溶液。
取相同批次的雷替曲塞约0.1g，精密称定，平行9份，分别移取溶液1、溶液2和溶液3各1.0ml溶解，每3份加一种溶液，分别摇匀，即得9份供试品溶液。按外标法以峰面积计算回收率。回收率依次分别为： 98.8%，97.0%，97.8%，RSD在2.17%～3.27%之间。
8.供试品的测定
照2.2 项下的方法制备供试品溶液与对照品溶液， 在上述色谱条件下测定， 3批原料药中检测出甲醇分别为0.012%，0.011%，0.012%，其他溶剂未检出。
三、讨论
本方法简便，灵敏，精密度，回收率符合中国药典2010年版的要求，因此本色谱方法适用于雷替曲塞有机溶剂残留量的检测。
参考文献
[1]徐红，杨钊，谢宜名，李新荣 气相色谱法测定美洛昔康中的3种殘留溶剂[药物分析杂质]2013.33（6）.
[2]中国药典2010 二部附录.
关键词：雷替曲塞 有机残留量 毛细管气相色谱法
雷替曲塞是一种胸腺合成酶抑制剂，属于一种喹唑啉叶酸盐类似物。在体内，雷替曲塞被细胞主动摄取后很快被叶酸基聚合谷氨酸合成酶代谢为一系列聚谷氨酸，这些代谢物比雷替曲塞具有更强抑制胸腺合成酶作用，从而抑制细胞DNA的合成，且能潴留在细胞内，长时间发挥抑制作用。在对结直肠癌的治疗中，疗效与氟尿嘧啶相似，但用雷替曲塞的副反应发生率低，方法简便，患者易于接受。由于在原药合成过程中使用了有机溶剂甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺，在成品中可能会有一定量的残留。按中国药典2010年版（附录Ⅷ）规定，该3种有机溶剂均有残留限量。对于原药中3种有机残留溶剂的色谱分析及残留量的测定尚未见文献报道。笔者参考了有关文献采用直接进样毛细管气相色谱法，测定了雷替曲塞原料药中甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺的残留量。方法简便、灵敏，结果准确可靠。
一、仪器与试药
1.仪器 Agilent 7890A
2.试药 雷替曲塞原料药3批
二、方法与结果
1.色谱条件 HP-5（30m×530μm×1.0μm）毛细管柱； 进样口温度为200℃，检测器温度为240℃。程序升温；初始温度35℃，维持5分钟，以每分钟25℃升温至220℃，维持2分钟； 分流比：10：1 ； 以DMSO为溶剂，直接进样1μl。
2.供试品溶液与对照品溶液的制备
取雷替曲塞样品0.1g，精密称定，用DMSO1.0ml溶解，作为供试品溶液。
精密称取甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺各适量，加二甲基亚砜制成每1ml中分别约含甲醇300μg、二氯甲烷60μg、N，N-二甲基甲酰胺88μg的混合溶液，作为对照品溶液。
3.系统适用性溶液
取DMSO空白溶剂1μl进行测定，结果表明溶剂无干扰。取对照品溶液1μl进行测定，记录色谱图，甲醇tR≈4.6min，二氯甲烷tR≈6.3min，N，N-二甲基甲酰胺tR≈8.4min。结果表明，各被测溶剂之间分离良好。
4.线性范围及标准曲线
取甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺适量，精密称定，用DMSO稀释制成一系列溶液，照上述色谱条件分别进行测定，以被测物峰面积为纵坐标，以被测物的质量浓度为横坐标进行线性回归。上述3种被测物的线性范围（μg/ml）依次是：30.1～361.2， 6.21～74.5， 8.82～105.8。回归方程及相关系数依次是：
Y1 = 0.6037X1 - 1.9640，r1=0.9994；
Y2 =0.4770X2 - 0.7893， r2=0.9995；
Y3= 0.6289X3 - 0.0054， r3=0.9999。
5.精密度实验
在上述色谱条件下，取对照品溶液（每1ml中含甲醇300μg，二氯甲烷60μg，N，N-二甲基甲酰胺88μg的混合溶液），连续进样6次，计算对照品溶液中被测溶剂的RSD依次为2.34% ，2.25%，2.53%。
6.最低检测限
取对照品溶液用DMSO逐步稀释，依据S/N≥3，确定甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺的最低检测限依次是2.0，1.2，1.5。
7.回收率实验
取甲醇约0.30g，二氯甲烷约0.06g，N，N-二甲基甲酰胺约0.088g，精密称定，置已加少许DMSO的10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀。移取储备液 1.0ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得每1ml中含甲醇约3000μg，二氯甲烷约600μg，N，N-二甲基甲酰胺约880μg的混合溶液。
溶液1： 精密移取混合溶液0.8ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得对照品溶液的80%溶液。
溶液2： 精密移取混合溶液1.0ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得对照品溶液的100%溶液。
溶液3： 精密移取混合溶液1.2ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得对照品溶液的120%溶液。
取相同批次的雷替曲塞约0.1g，精密称定，平行9份，分别移取溶液1、溶液2和溶液3各1.0ml溶解，每3份加一种溶液，分别摇匀，即得9份供试品溶液。按外标法以峰面积计算回收率。回收率依次分别为： 98.8%，97.0%，97.8%，RSD在2.17%～3.27%之间。
8.供试品的测定
照2.2 项下的方法制备供试品溶液与对照品溶液， 在上述色谱条件下测定， 3批原料药中检测出甲醇分别为0.012%，0.011%，0.012%，其他溶剂未检出。
三、讨论
本方法简便，灵敏，精密度，回收率符合中国药典2010年版的要求，因此本色谱方法适用于雷替曲塞有机溶剂残留量的检测。
参考文献
[1]徐红，杨钊，谢宜名，李新荣 气相色谱法测定美洛昔康中的3种殘留溶剂[药物分析杂质]2013.33（6）.
[2]中国药典2010 二部附录.