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摘要：目的：建立补中益气颗粒（黄芪、人参、炙甘草等）的质量标准。
方法：采用HPLC法对制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re进行含量测定。
结果：人参皂苷Rg1和人参皂苷Re在规定进样量范围内，线性关系良好、稳定性良好，回收率合格。
结论：该方法准确，可靠，可行性及重复性良好，可作为控制补中益气颗粒质量的办法。
关键词：补中益气 颗粒 质量标准 HPLC
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.11.538
【中图分类号】R2 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）11-0318-01
补中益气配方颗粒由黄芪、白术、陈皮、升麻、柴胡、人参、炙甘草、当归组成。具有补中益气、升阳举陷之功。主治脾胃气虚，四肢倦怠，气虚下陷，脱肛久痢等症 [1]。
为控制该制剂的内在质量，确保临床用药安全有效，本文应用高效液相色谱法对人参中主要有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Re进行了含量测定 [2，3]。
1 实验材料与试剂
1.1 色谱条件。色谱柱：Lichrospher-C18（江苏汉邦科技有限公司，200×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（1∶4）；检测波长：203nm；柱温：35℃；流速：1.0ml/min [4]。
1.2 对照品溶液的制备。取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的溶液，即得。
1.3 供试品溶液的制备。取本品约3g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，超声处理30分钟，放冷，摇匀，滤过，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次10ml，合并正丁醇液，用氨试液洗脱2次，每次20ml，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇稀释至10ml量瓶中定量，摇匀，滤过，即得。
1.4 阴性对照溶液的制备。取缺人参的阴性对照样品约3g，精密称定，按供试品溶液制备方法，同法制成阴性对照溶液。分别精密吸取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10ul，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。
2 方法学验证
供试品溶液色谱峰中，在与人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品相应的保留时间有吸收峰，而阴性对照溶液则在相应的保留时间无吸收峰出现，说明阴性对照无干扰。
2.1 线性关系考察。
2.1.1 人参皂苷Rg1。分别精密吸取人参皂苷Rg1对照品溶液（0.2130mg/ml）2、4、6、8ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配成不同浓度的系列对照品溶液，分别精密吸取溶液各10μl，注入液相色谱仪，得回归方程为：Y=358.26X-4.62，r=0.9994，结果表明：人参皂苷Rg1对照品进样量的范围内，良好的线性关系。
2.1.2 人参皂苷Re。分别精密吸取人参皂苷Re对照品溶液（0.1726mg/ml）2、4、6、8ml置10ml量瓶中，参照2.1.1法色谱条件测定，得回归方程为：Y=294.90X+2.40，r=0.9996，结果表明：人参皂苷Re对照品进样量在0.3452—1.7260μg范围内，呈良好的线性关系。
2.2 精密度试验。分别精密吸取人参皂苷Rg1对照品溶液（0.2130mg/ml）、人参皂苷Re对照品溶液（0.1726mg/ml）各5ul，按上述色谱条件重复进样5次，分别测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re峰面积积分值，计算其RSD分别为0.33%、0.36%。结果表明：精密度良好。
2.3 重复性试验。取补中益气颗粒（批号200911）约3g，精密称定，平行6份，按供试品溶液的制备方法制成供试液，分别进样10μl，分别测得人参皂苷Rg1、人参皂苷Re峰面积积分值并计算其总量，结果表明补中益气颗粒中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re总量的平均含量为0.0442%，RSD为1.45%。
2.4 稳定性试验。取补中益气颗粒（批号为200911）的供试品溶液，分别于0、1、2、4、8h，分别进样10ul，测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的峰面积，计算其RSD分别为0.68%、0.78%。结果表明：样品溶液在8小时内稳定。
2.5 回收率试验。取已知含量的样品（批号200911）1.50g，精密称定，分别加入人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品适量，按供试品溶液的制备方法制备加样回收供试品溶液，分别进样10μl，测定，以下列公式计算回收率，结果见表1，2。
表1 人参皂苷Rg1回收率试验
表2 人参皂苷Re回收率试验
试验结果表明：回收率在96%-100%之间，加样回收率良好。
3 实验结果
样品测定：取样品约3g，精密称定，按质量标准正文[含量测定]项下操作，结果见表3。
表3 样品的含量测定结果
上述结果，补中益气颗粒中人参皂苷Rg1与人参皂苷Re总量为0.409-0.441mg/g，暂定本品每1g含人参以人参皂苷Rg1（C42H72O14）人参皂苷Re（C48H82O18）计，不得少于0.30mg。
4 结论与讨论
本文曾采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器对方中黄芪进行含量测定，结果黄芪甲苷与相邻的色谱峰没有完全分离，有重叠现象，故暂不对黄芪中黄芪甲苷进行含量测定 [5，6]。
由于黄芪中黄芪甲苷的含量测定有干扰，后参考相关文献，采用乙腈-水（1∶4）为流动相；检测波长：203nm；对方中人参皂苷Rg1与人参皂苷Re的总量进行了测定，结果该法方法简便、专属性强及重现性好，结果准确可靠，可用于该制剂的质量控制和分析。
参考文献
[1] 湖南省中医药研究所编.《脾胃论》注释[M].北京：人民卫生出版社，1976
[2] 江阴天江药业科研部，等.中药配方颗粒质量标准（鉴定方法）.2007
[3] 江阴天江药业科研部，等.中药配方颗粒质量标准（含量测定方法）.2007
[4] 王幕邹.常用中草药高效液相色谱分析[M].北京：科学出版社.1998.171
[5] 秦雪梅，漆小梅，张忠鹏等.内蒙黄芪地上部分多糖的含量测定[J].山西医药，1995；11（1）：50-1
[6] 潘飞，冯毓秀，陈四保.黄苠类药用植物皂甙类成分分析[J].中国中药杂志，1995；20（7）：391-3
方法：采用HPLC法对制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re进行含量测定。
结果：人参皂苷Rg1和人参皂苷Re在规定进样量范围内，线性关系良好、稳定性良好，回收率合格。
结论：该方法准确，可靠，可行性及重复性良好，可作为控制补中益气颗粒质量的办法。
关键词：补中益气 颗粒 质量标准 HPLC
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.11.538
【中图分类号】R2 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）11-0318-01
补中益气配方颗粒由黄芪、白术、陈皮、升麻、柴胡、人参、炙甘草、当归组成。具有补中益气、升阳举陷之功。主治脾胃气虚，四肢倦怠，气虚下陷，脱肛久痢等症 [1]。
为控制该制剂的内在质量，确保临床用药安全有效，本文应用高效液相色谱法对人参中主要有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Re进行了含量测定 [2，3]。
1 实验材料与试剂
1.1 色谱条件。色谱柱：Lichrospher-C18（江苏汉邦科技有限公司，200×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（1∶4）；检测波长：203nm；柱温：35℃；流速：1.0ml/min [4]。
1.2 对照品溶液的制备。取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的溶液，即得。
1.3 供试品溶液的制备。取本品约3g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，超声处理30分钟，放冷，摇匀，滤过，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次10ml，合并正丁醇液，用氨试液洗脱2次，每次20ml，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇稀释至10ml量瓶中定量，摇匀，滤过，即得。
1.4 阴性对照溶液的制备。取缺人参的阴性对照样品约3g，精密称定，按供试品溶液制备方法，同法制成阴性对照溶液。分别精密吸取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10ul，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。
2 方法学验证
供试品溶液色谱峰中，在与人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品相应的保留时间有吸收峰，而阴性对照溶液则在相应的保留时间无吸收峰出现，说明阴性对照无干扰。
2.1 线性关系考察。
2.1.1 人参皂苷Rg1。分别精密吸取人参皂苷Rg1对照品溶液（0.2130mg/ml）2、4、6、8ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配成不同浓度的系列对照品溶液，分别精密吸取溶液各10μl，注入液相色谱仪，得回归方程为：Y=358.26X-4.62，r=0.9994，结果表明：人参皂苷Rg1对照品进样量的范围内，良好的线性关系。
2.1.2 人参皂苷Re。分别精密吸取人参皂苷Re对照品溶液（0.1726mg/ml）2、4、6、8ml置10ml量瓶中，参照2.1.1法色谱条件测定，得回归方程为：Y=294.90X+2.40，r=0.9996，结果表明：人参皂苷Re对照品进样量在0.3452—1.7260μg范围内，呈良好的线性关系。
2.2 精密度试验。分别精密吸取人参皂苷Rg1对照品溶液（0.2130mg/ml）、人参皂苷Re对照品溶液（0.1726mg/ml）各5ul，按上述色谱条件重复进样5次，分别测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re峰面积积分值，计算其RSD分别为0.33%、0.36%。结果表明：精密度良好。
2.3 重复性试验。取补中益气颗粒（批号200911）约3g，精密称定，平行6份，按供试品溶液的制备方法制成供试液，分别进样10μl，分别测得人参皂苷Rg1、人参皂苷Re峰面积积分值并计算其总量，结果表明补中益气颗粒中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re总量的平均含量为0.0442%，RSD为1.45%。
2.4 稳定性试验。取补中益气颗粒（批号为200911）的供试品溶液，分别于0、1、2、4、8h，分别进样10ul，测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的峰面积，计算其RSD分别为0.68%、0.78%。结果表明：样品溶液在8小时内稳定。
2.5 回收率试验。取已知含量的样品（批号200911）1.50g，精密称定，分别加入人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品适量，按供试品溶液的制备方法制备加样回收供试品溶液，分别进样10μl，测定，以下列公式计算回收率，结果见表1，2。
表1 人参皂苷Rg1回收率试验
表2 人参皂苷Re回收率试验
试验结果表明：回收率在96%-100%之间，加样回收率良好。
3 实验结果
样品测定：取样品约3g，精密称定，按质量标准正文[含量测定]项下操作，结果见表3。
表3 样品的含量测定结果
上述结果，补中益气颗粒中人参皂苷Rg1与人参皂苷Re总量为0.409-0.441mg/g，暂定本品每1g含人参以人参皂苷Rg1（C42H72O14）人参皂苷Re（C48H82O18）计，不得少于0.30mg。
4 结论与讨论
本文曾采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器对方中黄芪进行含量测定，结果黄芪甲苷与相邻的色谱峰没有完全分离，有重叠现象，故暂不对黄芪中黄芪甲苷进行含量测定 [5，6]。
由于黄芪中黄芪甲苷的含量测定有干扰，后参考相关文献，采用乙腈-水（1∶4）为流动相；检测波长：203nm；对方中人参皂苷Rg1与人参皂苷Re的总量进行了测定，结果该法方法简便、专属性强及重现性好，结果准确可靠，可用于该制剂的质量控制和分析。
参考文献
[1] 湖南省中医药研究所编.《脾胃论》注释[M].北京：人民卫生出版社，1976
[2] 江阴天江药业科研部，等.中药配方颗粒质量标准（鉴定方法）.2007
[3] 江阴天江药业科研部，等.中药配方颗粒质量标准（含量测定方法）.2007
[4] 王幕邹.常用中草药高效液相色谱分析[M].北京：科学出版社.1998.171
[5] 秦雪梅，漆小梅，张忠鹏等.内蒙黄芪地上部分多糖的含量测定[J].山西医药，1995；11（1）：50-1
[6] 潘飞，冯毓秀，陈四保.黄苠类药用植物皂甙类成分分析[J].中国中药杂志，1995；20（7）：391-3