【摘 要】
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目的 分析DNA甲基转移酶1(Dnmt1)基因的真核表达质粒对人结肠癌细胞错配修复基因甲基化及其转录水平和微卫星不稳定性(MSI)的影响.方法分别构建含有人的正义Dnmt1(HMT)和反义Dnmt1(THM)的真核表达质粒,将其转染入结肠癌SW1116细胞,以Western印迹实验分析各组细胞Dnmt1蛋白的表达情况.定量PCR检测hMLH1、hMSH2基因的表达.甲基化特异性PCR分析hMLH1
【机 构】
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200001,上海第二医科大学附属仁济医院,上海市消化疾病研究所,200001,上海第二医科大学附属仁济医院,上海市消化疾病研究所,200001,上海第二医科大学附属仁济医院,上海市消化疾病研究所,2
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目的 分析DNA甲基转移酶1(Dnmt1)基因的真核表达质粒对人结肠癌细胞错配修复基因甲基化及其转录水平和微卫星不稳定性(MSI)的影响.方法分别构建含有人的正义Dnmt1(HMT)和反义Dnmt1(THM)的真核表达质粒,将其转染入结肠癌SW1116细胞,以Western印迹实验分析各组细胞Dnmt1蛋白的表达情况.定量PCR检测hMLH1、hMSH2基因的表达.甲基化特异性PCR分析hMLH1、hMSH2启动子区甲基化情况,银染法研究其对微卫星不稳定性的影响.结果转染正义Dnmt1质粒的细胞hMLH1、hMSH2的启动子甲基化水平升高,基因mRNA表达降低.转染反义Dnmt1质粒可使细胞中hMSH2启动子呈非甲基化状态,基因表达增强.未发现转染正义和反义Dnmt1基因的SW1116细胞存在MSI的变化.结论重组Dnmt1表达质粒可通过调控人结肠癌细胞中错配修复基因的甲基化影响基因的表达。
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