【摘 要】
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目的探讨三氧化二砷（As2O3）诱导人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y细胞）凋亡及叶酸（FA）和维生素B12（VB12）的保护作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞，采用成组设计分为6组：对照组（正常培养）、砷暴露组（10.00 μmol/L As2O3）、FA干预组（0.30 mmol/L FA + 10.00 μmol/L As2O3）、VB12干预组（0.06 mmol/L VB12 + 10
【机 构】
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哈尔滨医科大学中国疾病预防控制中心地方病控制中心地氟病防治研究所 150081,哈尔滨医科大学中国疾病预防控制中心地方病控制中心地氟病防治研究所 150081,哈尔滨医科大学中国疾病预防控制中心地方病
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目的探讨三氧化二砷（As2O3）诱导人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y细胞）凋亡及叶酸（FA）和维生素B12（VB12）的保护作用。
方法体外培养SH-SY5Y细胞，采用成组设计分为6组：对照组（正常培养）、砷暴露组（10.00 μmol/L As2O3）、FA干预组（0.30 mmol/L FA + 10.00 μmol/L As2O3）、VB12干预组（0.06 mmol/L VB12 + 10.00 μmol/L As2O3）、联合干预组（0.30 mmol/L FA + 0.06 mmol/L VB12 + 10.00 μmol/L As2O3）及试剂对照组（0.30 mmol/L FA + 0.06 mmol/L VB12），各组细胞培养24 h（n = 3）。通过流式细胞仪测定各组细胞凋亡率；透射电镜观察细胞超微结构变化；实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹分别检测细胞凋亡相关指标B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）及Bcl-2相关X蛋白（Bax）的mRNA和蛋白表达情况；发光法检测细胞含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）3活性，并对以上指标进行统计分析。
结果各组间细胞凋亡率比较，差异有统计学意义（F = 213.036，P < 0.05）。砷暴露组细胞凋亡率[（44.43 ± 3.54）%]高于对照、FA干预、VB12干预、联合干预组[（1.80 ± 0.06）%、（14.37 ± 0.13）%、（19.10 ± 1.56）%、（17.11 ± 2.34）%，P均< 0.05]。透射电镜下可见砷暴露组SH-SY5Y细胞凋亡小体增多、线粒体肿胀变性、染色质凝集等，FA和VB12单独及联合干预后细胞形态及细胞器改变明显改善。各组间细胞Bcl-2、Bax mRNA和蛋白表达水平比较，差异均有统计学意义（F = 5.178、7.169，6.142、9.194，P均< 0.05）。砷暴露组Bcl-2蛋白表达水平低于对照组（P < 0.05），Bax mRNA和蛋白表达水平均高于对照组（P均< 0.05）；FA干预和联合干预组Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平均高于砷暴露组（P均< 0.05），VB12干预组Bcl-2 mRNA表达水平高于砷暴露组（P < 0.05）；FA干预、VB12干预和联合干预组Bax mRNA和蛋白表达水平均低于砷暴露组（P均< 0.05）。各组间细胞Caspase 3活性比较，差异有统计学意义（F = 84.604，P < 0.05）。砷暴露组细胞Caspase 3活性高于对照、FA干预、VB12干预、联合干预组（P均< 0.05）。
结论砷暴露可导致SH-SY5Y细胞凋亡及超微结构改变，FA和VB12可能通过调控Bcl-2/Bax途径、降低Caspase 3活性抑制细胞凋亡，在分子水平上发挥对神经细胞的保护作用。
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