【摘 要】
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目的:克隆解淀粉芽孢杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因(bglA)使其在解淀粉芽孢杆菌CICIM B4081中高效表达,并对重组酶进行酶学性质研究。方法:以解淀粉芽孢杆菌(CICIM B4801)染色
【机 构】
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江南大学生物工程学院生物能源与生物资源研究中心
【基金项目】
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国家“863”高技术研究发展计划项目(2006AA020204;2006AA10Z307)资助
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目的:克隆解淀粉芽孢杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因(bglA)使其在解淀粉芽孢杆菌CICIM B4081中高效表达,并对重组酶进行酶学性质研究。方法:以解淀粉芽孢杆菌(CICIM B4801)染色体DNA为模板,经过PCR扩增得到了大小约为0.8kb的β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因(bglA),构建了重组表达质粒pQ-bglA,通过电转化的方法将其转化入解淀粉芽孢杆菌(CICIM B4801)中。结果:得到了能高效表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶的重组解淀粉芽孢杆菌。在250mL摇瓶条件下,重组菌分解地衣多糖的胞外最高酶活达到了1 515.7U/mL,重组酶的最适作用温度为55℃,最适反应pH值为6.5。结论:重组菌的β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶活为原始菌株的11.84倍,实现了bglA基因在解淀粉芽孢杆菌中的高效表达。
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