【摘 要】
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目的:通过成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR/Cas9)系统在MCF-7乳腺癌细胞系中构建Rho相关蛋白激酶1(ROCK1)基因敲除模型,研究ROCK1 敲除对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影
【机 构】
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首都医科大学附属北京胸科医院/北京市结核病胸部肿瘤研究所细胞生物学研究室,首都医科大学附属北京妇产医院中心实验室
【基金项目】
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北京市医院管理局临床技术创新项目(XMLX201705),国家自然科学基金(81672838).
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目的:通过成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR/Cas9)系统在MCF-7乳腺癌细胞系中构建Rho相关蛋白激酶1(ROCK1)基因敲除模型,研究ROCK1 敲除对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:设计并合成靶向ROCK1 的向导RNA(sgRNA)寡核苷酸序列,长度为20 bp,构建到CRISPR单载体慢病毒上,感染并筛选稳定细胞株,采用划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力。结果:目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的GV392质粒载体中且测序正确;经Western b
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