【摘 要】
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目的探讨丝氨酸羟甲基转移酶2(SHMT2)诱导自噬促进结肠癌细胞化疗耐药的机制。方法通过TCGA数据库、实时定量PCR检测结肠癌组织SHMT2 mRNA水平,免疫组织化学染色法检测结肠癌
【机 构】
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西安医学院第一附属医院急诊科; 西安北车医院内科;
【基金项目】
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陕西省卫计委科技计划(2016D065)
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目的探讨丝氨酸羟甲基转移酶2(SHMT2)诱导自噬促进结肠癌细胞化疗耐药的机制。方法通过TCGA数据库、实时定量PCR检测结肠癌组织SHMT2 mRNA水平,免疫组织化学染色法检测结肠癌组织SHMT2的表达和分布, Western blot法检测SW480、 SW620、 HCT116、 CACO2、 RKO、 HCT8、 HT15和HT29结肠癌细胞中的SHMT2蛋白水平;在CACO2结肠癌细胞过表达SHMT2后,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性、异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测SHMT2对5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理的结肠癌细胞的凋亡,透射电镜观察结肠癌细胞自噬小体, Western blot法检测自噬相关的信号通路微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ(LC3Ⅱ/Ⅰ)、 P62、裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(c-PARP)和裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白水平,信号通路蛋白质磷酸化广谱筛选抗体芯片及Western blot法检测腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)的磷酸化水平。结果 SHMT2在结肠癌组织及细胞中高表达;过表达SHMT2后,细胞活力显著增加, LC3Ⅱ/Ⅰ比值上升;过表达SHMT2后, AMPK磷酸化水平升高, mTOR磷酸化水平降低。结论 SHMT2可能通过促进AMPK磷酸化直接或间接抑制mTOR活性诱导自噬,抑制化疗诱导的细胞凋亡,降低化疗敏感性。
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