【摘 要】
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西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)非结构蛋白NS5是病毒基因组复制的关键蛋白.以病毒全长cDNA克隆为模板,PCR扩增获得NS5的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)活性区(NS5pol)及该蛋白完
【机 构】
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军事医学科学院微生物流行病研究所; 军事医学科学院微生物流行病研究所 病原微生物生物安全国家重点实验室; 北京100071; 病原微生物生物安全国家重点实验室;
【基金项目】
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国家重点基础研究发展规划课题资助项目(973计划,No2002CB513205)~~
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西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)非结构蛋白NS5是病毒基因组复制的关键蛋白.以病毒全长cDNA克隆为模板,PCR扩增获得NS5的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)活性区(NS5pol)及该蛋白完整的编码序列(NS5F),分别克隆于原核表达载体pET-28a并转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达.表达的可溶性重组蛋白经Ni柱亲和层析纯化后进行SDS-PAGE和Western印迹鉴定.结果显示,二者均为病毒特异蛋白,且纯度均在90%以上.进一步的体外RdRp分析及EMSA的结果表明,NS5pol和NSF5均有较高的RdRp活性,且该活性具有RNA模板序列和二级结构的特异性.获得的具有RdRp活性的NS5pol和NS5F为西尼罗病毒基因组复制相关元件的研究奠定了基础.
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