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摘要：以13个葡萄品种为试材。采用高效液相色谱法(HPLC)检测其不同发育时期的叶片，果皮中白藜芦醇的含量。结果表明：不同葡萄品种中白藜芦醇含量不同；同一品种葡萄的各器官中白藜芦醇含量也不同，一般而言成熟果皮>成熟叶>茎段；不同成熟期叶片中白藜芦醇含量依次为成熟叶>老叶>嫩叶，不同成熟期果皮中白藜芦醇分布的规律为成熟果皮>嫩果皮；在所有检测样品中以刺葡萄的成熟果皮中白藜芦醇含量最高，为12.903μg／g。
关键词：高效液相色谱、葡萄、白藜芦醇
白藜芦醇(resveratrol，3，5，4-基苯代乙烯-反-均二苯代乙烯)是含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物，存在于许多植物中，其中葡萄、虎仗等植物的含量较高，它是植物体在恶劣环境下或遇到病原侵害时自身分泌的一种抗毒素，因此有“植物杀菌素”之称。现代药理实验证明，白藜芦醇能够阻止低密度脂蛋白的氧化。具有抗菌、抗脂质过氧化、防治心脏病、抗癌、抗血小板凝集与血管松弛、降低血脂和抗诱变等多种药理作用，并被确认为抗肿瘤剂和治疗心血管疾病的有效成分，因此被喻为继紫杉醇之后的又一新的绿色抗癌药物。近年来，欧美各国已将其开发成保健食品上市，剂型有片剂、胶囊、口服液等。目前白藜芦醇主要从葡萄皮、虎杖等植物中提取得到，因此筛选出高含量的葡萄资源具有重要意义。
1、材料与方法
1.1试验材料 试材取自湖南农业大学三年生葡萄园共13个品种。欧亚种：红地球、红宝石无核、优无核、维多利亚，粉红亚都蜜、奇妙无核，秋红、美人指。欧美种：巨峰、夏黑无核、夕阳红。东亚种：刺葡萄、腺枝葡萄。
1.2仪器和试剂 岛津LC-10A高效液相色谱仪，分析天平，超声波清洗器，甲醇(色谱纯)，乙腈(色谱纯)，超纯水，白藜芦醇对照品(99％)，其余试剂均为分析纯。
1.3测定方法 采用高效液相色谱法(HPLC)对葡萄器官中白藜芦醇的含量进行检测，所有的提取操作及测定工作均在严格避光的条件下进行，以避免白藜芦醇的氧化和分解。
1.3.1样品溶液的制备取13个葡萄品种新鲜无病害叶片(幼叶、成熟叶，老叶)，茎段各10g，乙酸乙酯匀浆磨碎，再用乙酸乙酯提取液定容到100ml，45℃超声波处理30min，避光常温下浸提24h，砂芯漏斗过滤。将滤液在45℃下用旋转蒸发仪蒸干，用甲醇定容到10ml，定容后用经过0.45um滤纸过滤，待HPLC检测。
取新鲜无病害成熟葡萄果实和坐果后1个月的嫩果果实，去掉果肉剥取果皮，取5g新鲜果皮放入真空干燥箱内干燥至恒重(45℃)。将干燥葡萄皮磨碎加入乙酸乙酯提取液定容到100ml，45℃超声波处理30min，避光常温下浸提24h，然后用砂芯漏斗抽滤。将滤液在45℃下用旋转蒸发仪蒸干，再用甲醇定容到10ml，定容后经过0.45um滤纸过滤，待HPLC检测。
1.3.2对照品溶液的制备 精密称取白藜芦醇对照品15mg，置于50ml容量瓶中，用甲醇溶解定溶至刻度，混匀制成300ug／ml标准储备液，备用。精密吸取标准储备1.0ml稀释成3.0ug／ml标准对照液，备用。
1.3.3色谱分离条件色谱柱Shim-packVP-ODS C18 5um 4.6×150mm；流动相为乙艄：水=30：70；流速1.0mL／min；检测波长302nin柱温40℃；进样量10uL。含量计算方法采用外标一点法进行计算。
1.3.4样品中白藜芦醇含量的测定。将制备好的供试液，各进样10μl，记录峰面积并计算白藜芦醇的含量。
2、结果与分析
2.1不同葡萄品种中叶片、茎段和果皮中白藜芦醇的含量 不同葡萄品种中自藜芦醇含量不同，同一种葡萄的各器官中白藜芦醇含量也不同。因此不同种类葡萄中白藜芦醇含量高低没有明显的规律。其中，在成熟叶中白藜芦醇含量最高的为粉红亚都蜜，达4.316 μg／g，最低的为红宝石，为0.217 μg／g。在茎段中白藜芦醇含量最高的为红宝石，达0.548 μg／g，最低的为秋红，为O.056 μg／g。在果皮中自藜芦醇含量最高为刺葡萄，达12.903 μg／g，最低的为优无核，达1.537 μg／g。
从表1数据中发现了白藜芦醇在同一葡萄品种各器官中含量分布的规律，即成熟果皮>成熟叶>茎段。
2.2不同成熟期叶片、果皮中白藜芦醇的含量 不同种类不同葡萄品种中不同成熟期叶片和不同成熟期果皮中自藜芦醇含量不同。
发现同一葡萄品种中不同成熟期叶片和不同成熟期果皮中自藜芦醇分布的规律：成熟叶>老叶>嫩叶，如粉红亚都蜜的成熟叶中自藜芦醇含量为4.316 μg／g是嫩叶的3.5倍；成熟果皮>嫩果皮，如刺葡萄的成熟果皮中白藜芦醇含量为12.903 μg／g是其嫩果皮的12倍。
3，讨论
作为葡萄属植物体内的一种抗毒素，白藜芦醇的生物合成不仅受到病原侵害、不良外界环境条件等因素的影响，也与种类品种的差异有关。有研究表明，在相同的自然条件下，不同品种的葡萄其合成白藜芦醇的能力差异较大。陈雷的研究表明：瑰宝、峰寿，牛奶，花泽巨峰等鲜食葡萄的白藜芦醇含量较低，而赤霞珠，希拉、米勒、白诗南，梅露汁等酿酒葡萄的白藜芦醇含量则较高。向阳等对新疆不同地区19个品种葡萄皮中自藜芦醇进行了研究比较，发现伊宁产红克里米斯克的含量最高为155.20 μg／g，其次为该区产的红地球，含量为41.70μg／g，其余品种含量均在1-17μg／g，而侯斌峰发现鄯善马奶子葡萄叶中白藜卢醇的含量592.83μg／g，高于伊宁产红克里米斯克葡萄皮中的含量。本实验结果表明，不同种类葡萄中白藜芦醇含量有较大的差异，白藜芦醇含量最高为刺葡萄果皮，为12.903μg／g，最低为维多利亚茎段0.014 μg／g。但各品种间含量的高低并没有明显的规律。
葡萄不同组织中白藜芦醇的含量不同。陈雷的研究发现了不同部位白藜芦醇的含量变化的大致趋势：果穗轴，果皮>叶片、种籽，叶柄>果肉。而段朝辉通过研究中国葡萄野生种11个种或变种36个株系成熟浆果中白藜芦醇的含量，认为白藜芦醇在果穗的不同组织中含量最高的组织是穗轴，其后依次是果皮，种籽和果肉。根据本实验的结果，发现了白藜芦醇在同一葡萄品种各器官中含量分布的规律，即成熟果皮>成熟叶>茎段。
在葡萄的不同生育时期，其白藜芦醇的含量也会发生较大的变化。段朝辉发现毛葡萄丹-2和欧洲葡萄黑诺比浆果，其白藜芦醇含量最高时期为生理成熟期，依次是转熟期和绿果期；余兴等的研究表明，在蛇龙珠葡萄生K期间，其果实白藜芦醇含量在8月10日达到最高。本实验中，白藜芦醇的含量变化规律是成熟叶>老叶>嫩叶，成熟果皮>嫩果皮。
在所有检测器官中，刺葡萄的成熟果皮中白藜芦醇含量最高，为12.903μg／g。因此，在成熟期采收果实可有效获得和利用白藜芦醇。当前刺葡萄主要用于酿制葡萄酒，其葡萄皮是原料中的主要废弃物，因此可以从这些废弃物中提取白藜芦醇，这为刺葡萄的开发和利用提供了一条高附加值的综合利用途径。
关键词：高效液相色谱、葡萄、白藜芦醇
白藜芦醇(resveratrol，3，5，4-基苯代乙烯-反-均二苯代乙烯)是含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物，存在于许多植物中，其中葡萄、虎仗等植物的含量较高，它是植物体在恶劣环境下或遇到病原侵害时自身分泌的一种抗毒素，因此有“植物杀菌素”之称。现代药理实验证明，白藜芦醇能够阻止低密度脂蛋白的氧化。具有抗菌、抗脂质过氧化、防治心脏病、抗癌、抗血小板凝集与血管松弛、降低血脂和抗诱变等多种药理作用，并被确认为抗肿瘤剂和治疗心血管疾病的有效成分，因此被喻为继紫杉醇之后的又一新的绿色抗癌药物。近年来，欧美各国已将其开发成保健食品上市，剂型有片剂、胶囊、口服液等。目前白藜芦醇主要从葡萄皮、虎杖等植物中提取得到，因此筛选出高含量的葡萄资源具有重要意义。
1、材料与方法
1.1试验材料 试材取自湖南农业大学三年生葡萄园共13个品种。欧亚种：红地球、红宝石无核、优无核、维多利亚，粉红亚都蜜、奇妙无核，秋红、美人指。欧美种：巨峰、夏黑无核、夕阳红。东亚种：刺葡萄、腺枝葡萄。
1.2仪器和试剂 岛津LC-10A高效液相色谱仪，分析天平，超声波清洗器，甲醇(色谱纯)，乙腈(色谱纯)，超纯水，白藜芦醇对照品(99％)，其余试剂均为分析纯。
1.3测定方法 采用高效液相色谱法(HPLC)对葡萄器官中白藜芦醇的含量进行检测，所有的提取操作及测定工作均在严格避光的条件下进行，以避免白藜芦醇的氧化和分解。
1.3.1样品溶液的制备取13个葡萄品种新鲜无病害叶片(幼叶、成熟叶，老叶)，茎段各10g，乙酸乙酯匀浆磨碎，再用乙酸乙酯提取液定容到100ml，45℃超声波处理30min，避光常温下浸提24h，砂芯漏斗过滤。将滤液在45℃下用旋转蒸发仪蒸干，用甲醇定容到10ml，定容后用经过0.45um滤纸过滤，待HPLC检测。
取新鲜无病害成熟葡萄果实和坐果后1个月的嫩果果实，去掉果肉剥取果皮，取5g新鲜果皮放入真空干燥箱内干燥至恒重(45℃)。将干燥葡萄皮磨碎加入乙酸乙酯提取液定容到100ml，45℃超声波处理30min，避光常温下浸提24h，然后用砂芯漏斗抽滤。将滤液在45℃下用旋转蒸发仪蒸干，再用甲醇定容到10ml，定容后经过0.45um滤纸过滤，待HPLC检测。
1.3.2对照品溶液的制备 精密称取白藜芦醇对照品15mg，置于50ml容量瓶中，用甲醇溶解定溶至刻度，混匀制成300ug／ml标准储备液，备用。精密吸取标准储备1.0ml稀释成3.0ug／ml标准对照液，备用。
1.3.3色谱分离条件色谱柱Shim-packVP-ODS C18 5um 4.6×150mm；流动相为乙艄：水=30：70；流速1.0mL／min；检测波长302nin柱温40℃；进样量10uL。含量计算方法采用外标一点法进行计算。
1.3.4样品中白藜芦醇含量的测定。将制备好的供试液，各进样10μl，记录峰面积并计算白藜芦醇的含量。
2、结果与分析
2.1不同葡萄品种中叶片、茎段和果皮中白藜芦醇的含量 不同葡萄品种中自藜芦醇含量不同，同一种葡萄的各器官中白藜芦醇含量也不同。因此不同种类葡萄中白藜芦醇含量高低没有明显的规律。其中，在成熟叶中白藜芦醇含量最高的为粉红亚都蜜，达4.316 μg／g，最低的为红宝石，为0.217 μg／g。在茎段中白藜芦醇含量最高的为红宝石，达0.548 μg／g，最低的为秋红，为O.056 μg／g。在果皮中自藜芦醇含量最高为刺葡萄，达12.903 μg／g，最低的为优无核，达1.537 μg／g。
从表1数据中发现了白藜芦醇在同一葡萄品种各器官中含量分布的规律，即成熟果皮>成熟叶>茎段。
2.2不同成熟期叶片、果皮中白藜芦醇的含量 不同种类不同葡萄品种中不同成熟期叶片和不同成熟期果皮中自藜芦醇含量不同。
发现同一葡萄品种中不同成熟期叶片和不同成熟期果皮中自藜芦醇分布的规律：成熟叶>老叶>嫩叶，如粉红亚都蜜的成熟叶中自藜芦醇含量为4.316 μg／g是嫩叶的3.5倍；成熟果皮>嫩果皮，如刺葡萄的成熟果皮中白藜芦醇含量为12.903 μg／g是其嫩果皮的12倍。
3，讨论
作为葡萄属植物体内的一种抗毒素，白藜芦醇的生物合成不仅受到病原侵害、不良外界环境条件等因素的影响，也与种类品种的差异有关。有研究表明，在相同的自然条件下，不同品种的葡萄其合成白藜芦醇的能力差异较大。陈雷的研究表明：瑰宝、峰寿，牛奶，花泽巨峰等鲜食葡萄的白藜芦醇含量较低，而赤霞珠，希拉、米勒、白诗南，梅露汁等酿酒葡萄的白藜芦醇含量则较高。向阳等对新疆不同地区19个品种葡萄皮中自藜芦醇进行了研究比较，发现伊宁产红克里米斯克的含量最高为155.20 μg／g，其次为该区产的红地球，含量为41.70μg／g，其余品种含量均在1-17μg／g，而侯斌峰发现鄯善马奶子葡萄叶中白藜卢醇的含量592.83μg／g，高于伊宁产红克里米斯克葡萄皮中的含量。本实验结果表明，不同种类葡萄中白藜芦醇含量有较大的差异，白藜芦醇含量最高为刺葡萄果皮，为12.903μg／g，最低为维多利亚茎段0.014 μg／g。但各品种间含量的高低并没有明显的规律。
葡萄不同组织中白藜芦醇的含量不同。陈雷的研究发现了不同部位白藜芦醇的含量变化的大致趋势：果穗轴，果皮>叶片、种籽，叶柄>果肉。而段朝辉通过研究中国葡萄野生种11个种或变种36个株系成熟浆果中白藜芦醇的含量，认为白藜芦醇在果穗的不同组织中含量最高的组织是穗轴，其后依次是果皮，种籽和果肉。根据本实验的结果，发现了白藜芦醇在同一葡萄品种各器官中含量分布的规律，即成熟果皮>成熟叶>茎段。
在葡萄的不同生育时期，其白藜芦醇的含量也会发生较大的变化。段朝辉发现毛葡萄丹-2和欧洲葡萄黑诺比浆果，其白藜芦醇含量最高时期为生理成熟期，依次是转熟期和绿果期；余兴等的研究表明，在蛇龙珠葡萄生K期间，其果实白藜芦醇含量在8月10日达到最高。本实验中，白藜芦醇的含量变化规律是成熟叶>老叶>嫩叶，成熟果皮>嫩果皮。
在所有检测器官中，刺葡萄的成熟果皮中白藜芦醇含量最高，为12.903μg／g。因此，在成熟期采收果实可有效获得和利用白藜芦醇。当前刺葡萄主要用于酿制葡萄酒，其葡萄皮是原料中的主要废弃物，因此可以从这些废弃物中提取白藜芦醇，这为刺葡萄的开发和利用提供了一条高附加值的综合利用途径。