【摘 要】
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本研究以腹泻牛粪便基因组DNA为模板,扩增MAP0862基因,构建重组表达载体pET-30a(+)-MAP0862和pEGX-6P-1-MAP0862,通过原核表达系统表达His-MAP0862和GST-MAP0862蛋白,经纯化
【基金项目】
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山东省自然科学基金项目“副结核分枝杆菌特异性抗原MAP0862在宿主细胞内的定位及其功能研究”(ZR2017PC023),“十三五”国家重点研发计划项目“牛羊重要疫病诊断与检测新技术研究”(2016YFD0500900),现代农业(奶牛)产业技术体系科学家岗位项目(CARS-36),山东省农业科学院农业科技创新工程项目“主要畜禽疫病监测和预警”(CXGC2016A10).
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本研究以腹泻牛粪便基因组DNA为模板,扩增MAP0862基因,构建重组表达载体pET-30a(+)-MAP0862和pEGX-6P-1-MAP0862,通过原核表达系统表达His-MAP0862和GST-MAP0862蛋白,经纯化后制备兔源高免血清,建立ELISA特异性检测方法,最后将纯化蛋白和ELISA方法用于牛副结核病临床样品检测,并对检测数据进行分析。结果表明,以MAP0862蛋白为检测原建立的ELISA检测方法在临床样品检测中具有较高的特异性和敏感性,说明MAP0862蛋白适用于副结核病抗体检测。
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