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使用过量的N,N′-O-苯二马来酰亚胺将马来酰亚胺基导入β-D-半乳糖苷酶,然后利用豚鼠抗胰岛素Fab′铰链部的巯基与β-D-半乳糖苷酶-马来酰亚胺基反应,制备Fab′-β-D一半乳糖苷酶交联物。这种交联方法,交联物中豚鼠Fab′的回收率达55%。以4-甲基伞型酮-β-D一半乳糖苷作为酶的荧光底物,测定β-D-半乳糖苷酶活力,酶的测定极限小至10-20mol/管(反应23小时)和10-19 mol/管(反应1小时),比使用邻-硝基苯β-D-半乳糖苷作为β-D-半乳糖苷酶底物的比色定量法灵敏l000倍,也比使用对-羟基苯丙酸作为辣根过氧化酶底物的荧光定量法灵敏3~30倍,将上述Fab′-β-D-半乳糖苷酶交联物和荧光法测定β-D-半乳糖苷酶活力的方法应用于建立胰岛素的酶免疫测定技术,小至0.01μU/管的胰岛素能被测出。本方法可用于其它抗原的高灵敏度酶免疫测定。