【摘 要】
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本研究通过对玻璃珠-酚仿RNA提取方法进行改进优化,实现对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌这3类微生物RNA高效稳定的提取。结果表明,玻璃珠-酚仿提取法能有效提取的RNA最低
【机 构】
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北京农学院食品科学与工程学院食品质量与安全北京实验室/农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室/微生态制剂关键技术开发北京市工程实验室/北京市食品安全免疫快速检测工程技术研究中心,中国青年
【基金项目】
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北京市教委科研计划支持项目(KM201610020015);北京市属高等学校高层次人才引进与培养长城学者计划(CIT&TGD20140315);杨胜先生门生社群项目(C2016028)
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本研究通过对玻璃珠-酚仿RNA提取方法进行改进优化,实现对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌这3类微生物RNA高效稳定的提取。结果表明,玻璃珠-酚仿提取法能有效提取的RNA最低菌体细胞量为1×107个,远低于试验所选商业化试剂盒所需细胞量。以1×107个细胞量为例,利用Beadbeater仪破碎30 s,使用直径100μm的玻璃珠破碎提取得到的细菌RNA浓度显著高于使用直径500μm的玻璃珠提取的。使用2种直径的玻璃珠所得酵母菌RNA浓度无显著性差异。在直径100μm的条件下,破碎30 s即可保证RNA的高效提取,对于长双歧杆菌、大肠杆菌和酵母菌,破碎时间长达150 s也不会引起RNA降解。本法所提RNA的A260/A280为1.96~2.10,A260/A230为2.03~2.44,浓度和纯度均优于试验所选商业化试剂盒所提的RNA。
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