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摘 要：提出了采用沉淀蛋白质超声提取-气相色谱外标法定量测定乳味饮料中甜蜜素的方法。结果显示，提取方式选择超声提取10min，提取率最高，甜蜜素浓度在2～10 mg/ml呈线性关系。在2个标准加入水平下进行回收率和精密度实验，加标回收率均处于98.1%～101.2%之间，相对标准偏差（n=6）小于1.95%。
关键词：乳味饮料；甜蜜素；超声提取
甜蜜素也叫环己基氨基磺酸钠，通常是指环己基氨基磺酸的钠盐或钙盐。甜蜜素的甜味纯正，甜度通常认为是蔗糖的30倍，属于非营养型合成甜味剂。通常用于饮料、果汁、冰激凌、糕点食品及蜜饯等中。甜蜜素在美国是禁止使用的，被认为有致癌的可能性，但是，承认甜蜜素甜味剂地位的国家和地区有超过55个，包括中国在内。根据我国食品安全国家标准-《食品添加剂使用标准》GB 2760-2011，饮料的添加限量为0.65g/kg，认为只要在这个限量以下就是安全的。
甜蜜素作为一种重要的食品添加剂，在食品监督检测机构是需要能够准确检测其含量的，我国的食品检测方法主要依据是《食品中环己基氨基磺酸钠的测定》GB/T 5009.97-2003。但是乳味饮料作为饮料家族中的一个重要成员，采用GB/T 5009.97-2003的方法检测是有困难的，主要问题有两个，第一，正己烷层和饮料中的蛋白质融为一体，无法分离。第二，磺化后的环己醇亚硝酸酯无法完全提出。针对以上问题，本文采用乙酸锌-亚铁氰化钾溶液沉淀蛋白，超声波提取，气相色谱外标法定量测定的方法检测，该法线性范围宽、重复性好、准确度高等优点。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
安捷伦7890A气相色谱仪（带FID检测器）；超声波萃取仪（宁波新芝生物科技股份有限公司）。
环己基氨基磺酸钠标准溶液（国家标准品中心）
正己烷，亚硝酸钠，硫酸，氯化钠，乙酸锌，亚铁氰化钾等
1.2色谱条件
载气为99.99%高纯氮气；色谱柱：DB-5 （30m-0.25mm-0.32mm）；分流不分离进样口温度为150℃，分流比20：1；检测器温度为200℃；柱流量为4ml/min，柱箱温度条件：恒温80℃，保持8分钟。
1.3标准溶液的制备
精密称取甜蜜素0.2000，0.4000，0.6000，0.8000，1.0000g至100ml容量瓶中，用纯水定容，混匀，分别得到标准溶液成2、4、6、8、10mg/ml的系列标准溶液。
1.4供试品溶液的制备
量取乳味饮料20ml，置于冰浴中，加入2ml10.6%亚铁氰化钾和2ml 21.6%乙酸锌溶液沉淀蛋白质，静置10min，加入5ml50g/L亚硝酸钠溶液，5ml100g/L硫酸溶液，摇匀，置冰浴中30min，并经常摇动，然后准确加入10ml正己烷，5g氯化钠，摇匀并漩涡混合1min，超声波萃取10min，待静止分层后吸出己烷层，离心分离后待测。
2 结果与讨论
2.1 样品前处理优化
2.1.1沉淀蛋白与不沉淀蛋白
采用不沉淀蛋白质的方法处理时，加入硫酸和亚硝酸钠磺化后，用正己烷提取时，混合之后静止后，无法分层。因此，无法进行分析。
采用沉淀蛋白质的方法处理时，先沉淀蛋白，再加入硫酸和亚硝酸钠磺化后，用正己烷提取时，混合之后静止，能够彻底分层，为仪器分析创造条件。
2.1.2沉淀蛋白条件优化
量取样品20ml，分别加入亚铁氰化钾和乙酸锌各0.5ml，1.0ml，2.0 ml，4.0 ml。结果见表1，其中2.0ml能够充分沉淀20ml样品的蛋白质。因此取2.0ml沉淀剂作为沉淀条件。
2.2萃取条件的选择
2.2.1混合与超声波萃取
量取相同样品5份，样品处理后加入正己烷萃取时，分别采用漩涡混合提取，超声波提取5min，10min，15min，20min。离心后测定，检测结果表2。由表中结果可以看出，超声波提取明显优于漩涡混合提取，超声条件优化中，超声10min基本达到最好的超声效果，因此，超声10min为本实验萃取条件较为合理。
2.3方法的专属性
在上述色谱条件和实验条件下，分别取空白溶液、标准品溶液与供试品溶液进行测定，得到特征峰，结果表明，测定无干扰，其中标准谱图见图1
2.4标准曲线和定量限
将1.3节中所制备的甜蜜素标准溶液进行分析，以质量浓度（mg/ml）为横坐标X，甜蜜素锋面积为纵坐标进行线性回归，得甜蜜素标准曲线Y=1546.9X+2154.6（R=0.9998），结果表明，甜蜜素浓度在2～10 mg/ml内线性关系良好。
2.5精密度试验
采用浓度分别为4、8mg/ml的甲醇标准溶液各5份进行分析，计算得到相对标准偏差（RSD），结果见表2。结果表明，两个浓度的标准溶液的RSD均小于1.95%，符合检测方法要求。
2.6回收试验
量取已知甜蜜素含量的乳味饮料样品6份，分别加入质量浓度分别为4、8mg/ml的甜蜜素标准溶液1ml，每个浓度3份，在2.1和2.2的条件下进行分析，计算回收率，结果见表3。甲醇的回收率均处于98.1%～101.2%之间。
本方法建立了乳味饮料中甜蜜素的检测方法，具有操作简单、杂质含量低、回收率良好和稳定性好的优点，用于实际样品的测定，结果满意。
关键词：乳味饮料；甜蜜素；超声提取
甜蜜素也叫环己基氨基磺酸钠，通常是指环己基氨基磺酸的钠盐或钙盐。甜蜜素的甜味纯正，甜度通常认为是蔗糖的30倍，属于非营养型合成甜味剂。通常用于饮料、果汁、冰激凌、糕点食品及蜜饯等中。甜蜜素在美国是禁止使用的，被认为有致癌的可能性，但是，承认甜蜜素甜味剂地位的国家和地区有超过55个，包括中国在内。根据我国食品安全国家标准-《食品添加剂使用标准》GB 2760-2011，饮料的添加限量为0.65g/kg，认为只要在这个限量以下就是安全的。
甜蜜素作为一种重要的食品添加剂，在食品监督检测机构是需要能够准确检测其含量的，我国的食品检测方法主要依据是《食品中环己基氨基磺酸钠的测定》GB/T 5009.97-2003。但是乳味饮料作为饮料家族中的一个重要成员，采用GB/T 5009.97-2003的方法检测是有困难的，主要问题有两个，第一，正己烷层和饮料中的蛋白质融为一体，无法分离。第二，磺化后的环己醇亚硝酸酯无法完全提出。针对以上问题，本文采用乙酸锌-亚铁氰化钾溶液沉淀蛋白，超声波提取，气相色谱外标法定量测定的方法检测，该法线性范围宽、重复性好、准确度高等优点。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
安捷伦7890A气相色谱仪（带FID检测器）；超声波萃取仪（宁波新芝生物科技股份有限公司）。
环己基氨基磺酸钠标准溶液（国家标准品中心）
正己烷，亚硝酸钠，硫酸，氯化钠，乙酸锌，亚铁氰化钾等
1.2色谱条件
载气为99.99%高纯氮气；色谱柱：DB-5 （30m-0.25mm-0.32mm）；分流不分离进样口温度为150℃，分流比20：1；检测器温度为200℃；柱流量为4ml/min，柱箱温度条件：恒温80℃，保持8分钟。
1.3标准溶液的制备
精密称取甜蜜素0.2000，0.4000，0.6000，0.8000，1.0000g至100ml容量瓶中，用纯水定容，混匀，分别得到标准溶液成2、4、6、8、10mg/ml的系列标准溶液。
1.4供试品溶液的制备
量取乳味饮料20ml，置于冰浴中，加入2ml10.6%亚铁氰化钾和2ml 21.6%乙酸锌溶液沉淀蛋白质，静置10min，加入5ml50g/L亚硝酸钠溶液，5ml100g/L硫酸溶液，摇匀，置冰浴中30min，并经常摇动，然后准确加入10ml正己烷，5g氯化钠，摇匀并漩涡混合1min，超声波萃取10min，待静止分层后吸出己烷层，离心分离后待测。
2 结果与讨论
2.1 样品前处理优化
2.1.1沉淀蛋白与不沉淀蛋白
采用不沉淀蛋白质的方法处理时，加入硫酸和亚硝酸钠磺化后，用正己烷提取时，混合之后静止后，无法分层。因此，无法进行分析。
采用沉淀蛋白质的方法处理时，先沉淀蛋白，再加入硫酸和亚硝酸钠磺化后，用正己烷提取时，混合之后静止，能够彻底分层，为仪器分析创造条件。
2.1.2沉淀蛋白条件优化
量取样品20ml，分别加入亚铁氰化钾和乙酸锌各0.5ml，1.0ml，2.0 ml，4.0 ml。结果见表1，其中2.0ml能够充分沉淀20ml样品的蛋白质。因此取2.0ml沉淀剂作为沉淀条件。
2.2萃取条件的选择
2.2.1混合与超声波萃取
量取相同样品5份，样品处理后加入正己烷萃取时，分别采用漩涡混合提取，超声波提取5min，10min，15min，20min。离心后测定，检测结果表2。由表中结果可以看出，超声波提取明显优于漩涡混合提取，超声条件优化中，超声10min基本达到最好的超声效果，因此，超声10min为本实验萃取条件较为合理。
2.3方法的专属性
在上述色谱条件和实验条件下，分别取空白溶液、标准品溶液与供试品溶液进行测定，得到特征峰，结果表明，测定无干扰，其中标准谱图见图1
2.4标准曲线和定量限
将1.3节中所制备的甜蜜素标准溶液进行分析，以质量浓度（mg/ml）为横坐标X，甜蜜素锋面积为纵坐标进行线性回归，得甜蜜素标准曲线Y=1546.9X+2154.6（R=0.9998），结果表明，甜蜜素浓度在2～10 mg/ml内线性关系良好。
2.5精密度试验
采用浓度分别为4、8mg/ml的甲醇标准溶液各5份进行分析，计算得到相对标准偏差（RSD），结果见表2。结果表明，两个浓度的标准溶液的RSD均小于1.95%，符合检测方法要求。
2.6回收试验
量取已知甜蜜素含量的乳味饮料样品6份，分别加入质量浓度分别为4、8mg/ml的甜蜜素标准溶液1ml，每个浓度3份，在2.1和2.2的条件下进行分析，计算回收率，结果见表3。甲醇的回收率均处于98.1%～101.2%之间。
本方法建立了乳味饮料中甜蜜素的检测方法，具有操作简单、杂质含量低、回收率良好和稳定性好的优点，用于实际样品的测定，结果满意。