【摘 要】
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在动物细胞中,抑制非同源末端连接(Non-homologous end joining,NHEJ)修复途径,可以提高同源重组(Homologous recombination,HR)修复基因组双链断裂(Double-strand brakes,DS
【机 构】
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新疆农垦科学院绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,新疆农业大学动物医学学院,中国农业大学动物科技学院
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(编号:31560321,31360276);兵团国际合作项目(编号:2013BC004)资助~~
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在动物细胞中,抑制非同源末端连接(Non-homologous end joining,NHEJ)修复途径,可以提高同源重组(Homologous recombination,HR)修复基因组双链断裂(Double-strand brakes,DSBs)的发生概率。为了提高绵羊胚胎成纤维细胞的HR效率,针对NHEJ修复途径中的关键因子Lig4(DNA ligase 4)基因,本文设计合成4个具有靶向性的siRNA(Small interfering RNA)。绵羊胚胎成纤维细胞经电转染导入si RNA,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测,筛选出有效抑制Lig4基因表达的2个siRNA。应用质粒重连法检测HR修复效率,将I-SceⅠ酶线性化的HR质粒和si RNA共转染绵羊胚胎成纤维细胞,经72 h培养及流式细胞仪检测,与对照组细胞比较,结果表明HR质粒重连效率提高了3~4倍。瞬间干扰Lig4基因的表达可提高HR质粒重连效率,为改善绵羊胚胎成纤维细胞基因打靶效率提供理论基础。
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