【摘 要】
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目的 建立基于多重置换扩增及测序技术的胚胎植入前HLA分型方法.方法 随机选取9对自愿捐献外周血和废弃胚胎的夫妇,取D3废弃的1PN、2PN、3PN受精胚胎,取单个或两个卵裂球细胞
【机 构】
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300053,天津市中心妇产科医院生殖医学中心
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目的 建立基于多重置换扩增及测序技术的胚胎植入前HLA分型方法.方法 随机选取9对自愿捐献外周血和废弃胚胎的夫妇,取D3废弃的1PN、2PN、3PN受精胚胎,取单个或两个卵裂球细胞,采用多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)进行全基因组扩增,对单个或两个卵裂球的MDA产物采用PCR扩增HLA-DR、DQ第2外显子,然后对扩增产物进行直接双向测序分型(sequencing based typing,SBT),确定胚胎HLA基因型;提取其父母外周血基因组DNA,采用同样的方法确定其HLA基因型;然后比较父母与胚胎之间HLA基因型,确定9个家庭成员各自的HLA单倍型及其遗传关系,并在废弃胚胎之间进行HLA配型.结果 76个废弃胚胎被分为两组:单卵裂球组36个胚胎,两个卵裂球组40个胚胎.单卵裂球组扩增成功率为94.1％;两个卵裂球组扩增成功率为100％.共有74个胚胎MDA扩增成功.其产物行PCR-SBT检测,阳性率为100％.单卵裂球组MDA产物测序阳性率为100％,DQ等位基因脱扣率为1.5％,DR等位基因脱扣率为0.两个卵裂球组MDA产物测序阳性率为100％,DQ、DR等位基因脱扣率均为0.胚胎HLA单倍体重新组合率为20.2％(30/148).废弃胚胎之间HLA配型一致的比例为20.3％(15/74).比理论值25％略低,可能与本实验使用分级差、异常受精胚胎有关.结论 植入前遗传学诊断/HLA分型方法MDA-PCR-SBT为选择与患儿HLA基因型一致且正常的纯合子(不携带致病基因)或者杂合子(携带隐性致病基因)胚胎移植,创造一个救助者同胞,分娩时使用救助者同胞的脐血或者骨髓移植用于治疗现存患儿提供了新的检测方法.
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