胶质纤维酸性蛋白的原核表达、纯化及鉴定

来源 :中国临床神经外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：wuhen_lu83

【摘要】

：

目的为获得高纯度的人胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。方法从人脑胶质瘤组织中提取mRNA,采用RT-PCR的方法克隆GFAP基因全长序列,利用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ将GFAP基因插入到原核

【作者】

：

吕立权曹鹏胡国汉骆纯侯立军卢亦成

【机构】

：

上海长征医院神经外科

【出处】

：

中国临床神经外科杂志

【发表日期】

：

2009年10期

【关键词】

：

胶质纤维酸性蛋白原核表达载体表达 Glial fibillary acidic protein Prokaryotic expression vector

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目的为获得高纯度的人胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。方法从人脑胶质瘤组织中提取mRNA,采用RT-PCR的方法克隆GFAP基因全长序列,利用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ将GFAP基因插入到原核表达载体pGEX4T2,对重组表达载体pGEX4T2-GFAP进行双酶切和测序鉴定。选择测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21,用终浓度为1mmol/L的异丙基-β-D-硫酸代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达GFAP-GST融合蛋白。经亲和层析纯化获得GFAP融合蛋白,并通过SDS-PAGE和western blot进

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