【摘 要】
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目的探讨自噬在天然萜类、双联苄类化合物诱导肿瘤细胞凋亡中的作用。方法以前期筛选得到的具有抑制肿瘤细胞增殖活性的三萜化合物ST52和乙酰基-11-酮基-β-乳香酸(AKBA)、双
【机 构】
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山东大学药学院天然药物化学研究所,山东大学医学院生化与分子生物学研究所,
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目的探讨自噬在天然萜类、双联苄类化合物诱导肿瘤细胞凋亡中的作用。方法以前期筛选得到的具有抑制肿瘤细胞增殖活性的三萜化合物ST52和乙酰基-11-酮基-β-乳香酸(AKBA)、双联苄化合物H50、F41、H48和Riccardin D(RD)处理稳定表达GFP-LC3的人胶质瘤细胞株U87,荧光显微镜观察GFP-LC3的聚集斑点,确定化合物的自噬诱导作用。Western blot检测人激素非依赖前列腺癌细胞株PC-3细胞中的自噬相关蛋白LC3、Atg5、Beclin1和p62的表达以及凋亡标志蛋白多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的剪切情况。自噬抑制剂或siRNA阻断Atg5表达后进行化合物处理,流式细胞技术检测细胞凋亡,MTT法检测细胞的增殖活力,确定自噬对化合物诱导凋亡的影响。结果筛选结果显示,双联苄类化合物均有不同程度的自噬诱导作用,其中RD的作用较强。RD促进PC-3细胞中LC3-I向LC3-II的转化,中等强度诱导Atg5和Beclin1的表达,并导致自噬底物p62的降解。抑制自噬后,能增加RD诱导的细胞凋亡与PARP剪切,但凋亡抑制剂Z-VAD-FMK并不影响RD对LC3-II的诱导程度。结论 RD诱导PC-3细胞产生具有保护性作用的自噬现象,抑制自噬可提高RD的抗肿瘤作用。
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